乌苏里蝮蛇蛇毒神经毒纯化与鉴定

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1、吉林大学生命科学院学士学位论文吉林省高等教育自学考试吉林大学生物制药专业本科毕业设计设计题目：乌苏里蝮蛇蛇毒神经毒纯化与鉴定设计作者：韩大伟考号：010605100329指导教师：完成时间：2009-8-10吉林大学生命科学学院二ＯＯ九年八月十日-5-吉林大学生命科学院学士学位论文目录一绪论11．蛇毒中的毒素及活性因子概述11.1作用于血液本身或各种血液成分的物质11.2影响血液循环物质21.3作用于横纹肌的物质21.4作用于平滑肌的物质21.5影响代谢的物质21.6改变血液中碱储备的物质21.7胞溶素21.8出血毒素21.9抑制因子31.10影响神经系统的物质32．蛇毒神经

2、毒素(neurotoxin，NT)的概述32.1分布32.2种类32.3结构及理化性质[3]42.4药理性质4-5-吉林大学生命科学院学士学位论文3．蛇毒神经毒素的镇痛特点53.1起效慢，维持时间长，效价高53.2无耐受和成瘾性64．蛇毒神经毒素的镇痛机制研究64.1镇痛作用与毒性的关系64.2镇痛作用与痛觉调控相关方面的关系74.3与NO的关系。95．蛇毒神经毒素的应用95.1作为检侧尼克酰胺型AchR的标记物105.2用于AchR的纯化105.3作为研究药物与受体相互作用的工具115.4作为研究AchR结构与性质的工具116．蛇毒神经毒素的临床应用117．本研究的目的12

3、二实验材料与方法141．实验材料141.1试剂141.2仪器151.3小鼠15-5-吉林大学生命科学院学士学位论文2．实验步骤与方法152.1纯化工艺条件摸索152.2乌苏里蝮蛇蛇毒神经毒素筛选策略202.3乌苏里蝮蛇蛇毒分离前的处理202.4乌苏里蝮蛇蛇毒离子交换色谱202.5凝胶过滤色谱纯化神经毒素222.6神经毒素的鉴定23三实验结果与讨论261．蝮蛇毒中神经毒素的分离261.1乌苏里蝮蛇蛇毒离子交换色谱261.2凝胶过滤色谱纯化神经毒素272．神经毒素的鉴定283．小结29四结论301．结论302．进一步工作的几点建议30参考文献32摘要iAbstractii-5-吉

4、林大学生命科学院学士学位论文致谢i-5-吉林大学生命科学院学士学位论文一绪论蛇作为一种古老的动物在地球上已经生存了1.35亿年。在现今存活的2700种蛇中，有毒蛇600多种，其中剧毒的有195种。我国蛇类资源丰富，已发现的蛇有165种，其中毒蛇有47种，隶属于4科25属，主要分布在长江以南地区。乌苏里蝮蛇(Gloydiusussurensis)，俗名土球子、草上飞、七寸子。属蝰蛇科(Crotalidae)，蝮蛇亚科，蝮蛇属(Agkistrodon)。主要分布于黑龙江、吉林等省。该蛇头部略呈三角形，头背有一深色倒“V”字形斑纹。成体长45～65cm，体重300～400g。中段背

5、鳞21行，腹鳞加尾下鳞188～213行，背面浅褐色，中央的两行有色较浅的暗褐色圆斑，通达尾末。眼后白眉显著，下颌部黄白色，一般无斑纹，少数呈灰色网纹。成体尾端不呈黄白色。雄蛇的尾较长，尾基较粗，自此向后逐渐变细。雌蛇尾较短，自泄殖腔孔向后突然变细[1]。1．蛇毒中的毒素及活性因子概述蛇毒是毒蛇头部两侧皮肤下方毒腺的分泌物，咬啮物体时经毒牙流出。7～8月排毒量最大，成体平均每次可排毒31.98mg，一般一个月采1次。蛇毒的主要生物学功能是帮助蛇捕食和消化食物。蛇毒中的毒素种类很多，都属于蛋白质和多肽。各种毒素或者单独作用或者协同作用。对蛇毒中的毒素分类方法很多，Kfobusit

6、zty(1936)根据[2]毒素的生理作用把蛇毒中的毒性组分大致分为10类：1.1作用于血液本身或各种血液成分的物质所有这类物质，或是加速，或是延缓血液凝固，或是引起溶血，或是减弱白细胞的活动性。这类物质如类凝血酶，直接溶血因子等。-35-吉林大学生命科学院学士学位论文1.2影响血液循环物质这类物质一部分作用于血管舒缩中心，一部分作用于血管末梢，使其舒张。此类物质如某些心脏毒素，舒缓激肽增强因子和降压因子等。1.3作用于横纹肌的物质这些物质可以改变肌肉细胞的通透性，引起组织肿胀，有些也可以引起心肌的收缩。1.4作用于平滑肌的物质通过对一些分离器官，如小肠，子宫，输卵管的实验，

7、可以证明此类物质的存在。小剂量蛇毒或其组分可以引起上述器官的收缩，大剂量则可以使其麻痹。1.5影响代谢的物质给家兔按每千克体重10mg的剂量注射烙铁头蛇毒或某些眼镜蛇科蛇毒，能够使家兔的血糖水平升至原来的200%，即使内脏神经已经切断，或者肾上腺已经除去，这个作用仍然存在。1.6改变血液中碱储备的物质矛头腹属、响尾蛇属和眼镜蛇属的蛇毒中含有可以改变血液中碱储备的物质。1.7胞溶素几乎所有的蛇毒都含有不同量的胞溶素，也称为膜活性肽。这些物质很容易被检测出来，蛇毒消除组织中组胺的能力就是基于其胞溶素成分。毒