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时间:2018-12-23
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1、专题1基因工程1.基因工程又叫做或。就是按照人们的愿望,把一种生物的某种基因提取出来,加以,然后放到另一种生物的细胞里,改造生物的。2.基因工程是在上进行的设计施工,基本工具是:基因的剪刀(分子手术刀)——;基因的针线(分子缝合针)——;基因的(分子运输车)——。3.限制酶(又称):主要从中分离纯化出来;能够识别双链DNA分子的某种,并且使每一条链中的两个核苷酸之间的断开,因此具有。DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端有和两种形式。例如,EcoRⅠ限制酶识别的序列是,在之间切割;SmaⅠ限制酶识别的序列是,在之间切割。4.DNA连接酶的作用是将拼接(即
2、形成,注意不是黏合或形成氢键)成新的DNA分子(注意DNA聚合酶只能在有的条件下将加到DNA片段的,形成磷酸二酯键);E·coliDNA连接酶来源于,只能将双链DNA片段之间连接起来;而T4DNA连接酶能缝合,但连接平末端的之间的效率。5.最常用的载体是,它是一种、结构简单、独立于细菌之外,并的很小的。6.真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行过的,其上有一个至多个,供外源DNA片段(基因)插入其中;还有特殊的,供。7.重组质粒进入受体细胞后,在细胞中进行自我复制(具有),或上,随染色体DNA进行同步复
3、制;在基因工程中使用的载体除质粒外,还、等。8.基因工程的基本操作流程:→→→。9.目的基因主要是指,也可以是一些;目的基因可以从自然界中已有的物种中分离出来(,建立从中获取或通过获取,一般只适合于,真核基因因为含有不适合该类方法),也可以用人工的方法合成(,通过mRNA反转录得到cDNA,然后建立从中获取或通过获取;如果基因比较小且核苷酸序列已知,也可以通过用化学方法直接人工合成)。10.基因组文库的构建:将某种生物体内的DNA提取出来,选用适当的,将DNA切成一定范围大小的DNA片段,然后,将这些DNA片段分别与连接起来,导入中储存,每个受体细菌都含有了
4、一段不同的DNA片段,而这个群体包含了这种生物的。11.cDNA文库的构建:用某种生物发育的通过产生(互补DNA)片段,与连接后储存在一个受体菌群中。12.cDNA文库属于。与基因组文库比较:cDNA文库较小,,仅含有某种生物的,;而基因组文库较大,,含有某种生物的,仅。13.PCR是的缩写,它是一项利用的原理在生物的核酸合成技术。反应中需要加入的物质有、、(的DNA聚合酶)、(dATP、dTTP、dGTP、dCTP)等;基本过程是:加热至90~95℃使→冷却至55~60℃使→加热至70~75℃使,如此反复进行,目的基因以(2n)形式扩增。14.是基因工程的
5、核心,其目的是,并且可以,同时,使目的基因能够。15.基因表达载体的组成:、、、、。启动子是一段有特殊结构的,位于基因的,是的部位,能驱动基因;终止子也是一段有特殊结构的,位于基因的,其作用是使下来;标记基因的作用是为了,从而将含有目的基因的细胞出来,最常用的标记基因是。16.将目的基因导入植物细胞最常用的方法是,另外还有和等。17.农杆菌是一种生活在土壤中的,能在自然条件下感染,而对大多数没有共5页第7页感染能力。当植物体受到损伤,伤口处的细胞会分泌大量的,吸引农杆菌移向这些细胞,这时农杆菌中的上的(可转移的DNA)可转移至受体细胞,并且到受体细胞上。18
6、.农杆菌转化法是将目的基因插入到上,通过农杆菌的作用,使目的基因进入植物细胞并插入到植物细胞中上,使目的基因的遗传特性得以;基因枪法是利用压缩气体产生的动力,将包裹在金属颗粒表面的打入受体细胞中,使目的基因与其整合并表达的方法,是常用的一种基因转化方法;花粉管通道法是在植物受粉后,,剪去,然后滴加,使目的基因借助进入受体细胞。19.将目的基因导入动物细胞最常用的方法是,基本的操作程序是:提纯含有目的基因的表达载体→从雌性动物体内取出卵(体内受精或体外受精均可以)→采用显微注射仪进行→早期胚胎培养→胚胎移植(哺乳动物)。20.原核生物通常作为受体细胞的原因是、
7、、等,其中以应用最为广泛。21.将目的基因导入大肠杆菌(细菌)最常用的方法是:先用处理细胞,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,即处于,再将溶于缓冲液中与混合。22.目的基因导入受体细胞后,是否可以其遗传特性,需要通过:(1)首先要检测转基因生物的染色体DNA上,检测方法是采用,即在上用等作标记,以此作为,使探针与待检基因组DNA杂交,如果显示出,则表明目的基因已插入染色体DNA中;(2)其次要检测目的基因,检测方法也是采用,同样用作,但是与杂交;(3)最后要检测目的基因,检测方法是从转基因生物中提取,用相应的进行,若出现,则表明目的基因已形
8、成蛋白质产品;(4)有时还要进行的鉴定,如需要做抗虫
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