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1、摘要2007年学位论文盲审抽检编号：论文题目寒兰离体化学诱变研究TheResearchonChemicalMutationinVitroofCymbidiumKanranMakino专业名称：植物学专业代码：071001种类（在相应方框内打√）：统招博士□统招硕士□同等学力人员申请硕士学位□工程硕士□高校教师在职攻读硕士学位□公共管理□工商管理□85摘要摘要本文以甲基磺酸乙酯(EMS)、硫酸二乙酯(DES)、秋水仙素(colchicines)、咖啡碱(caffein)、5-溴尿嘧啶(5-BU)、马来酰肼(MH)、亚硫酸钠(Na2SO3)为化学诱变剂，以寒兰(Cymbidiumkanr
2、anMakino)原球茎为材料进行离体化学诱变研究，探讨这7种化学诱变剂对寒兰原球茎生长、增殖和分化的效应，筛选适宜的诱变浓度和时间，以形态学方法鉴定再生植株的表型变异，以细胞学方法观察化学诱变剂对寒兰根尖细胞核的影响，并分析诱变后的再生植株在生理生化指标的变化，以ISSR–PCR扩增体系对化学诱变剂造成的寒兰遗传物质的改变进行了初步分析。结果表明：1.各化学诱变剂对寒兰原球茎的生长均有一定的抑制作用，随着浓度升高或时间的延长，原球茎的褐变率和死亡率升高，褐变率始终小于死亡率。2.各化学诱变剂对寒兰原球茎的增殖均有一定的抑制作用，随着浓度升高或时间的延长，原球茎的死亡率升高。增殖率和
3、绝对生长速度的变化与处理浓度和时间之间并非简单的相关关系。3.通过对各处理结果的分析，计算了7种诱变剂对寒兰原球茎的半致死量，它与浓度和时间都有关系，可作为寒兰离体化学诱变的参考剂量。4.再生植株在表型上均有一定的变异，主要以叶色变黄为主。其中EMS和秋水仙素处理后原球茎的再生植株表型变异显著，但是表型变异再生植株的比率并不高。5.各化学诱变剂都能在细胞学水平对寒兰根尖细胞核造成明显改变，主要有畸形核、微核、多核、核破裂、核质浓缩、染色体畸变(加倍、滞后、缺失)等现象。6.再生植株可溶性糖含量较正常植株有不同程度的升高；EMS、DES、秋水仙素和Na2SO3处理后的原球茎再生植株的可
4、溶性蛋白含量增高，咖啡碱、5-BU、马来酰肼处理后的原球茎再生植株的可溶性蛋白含量降低。7.再生植株的可溶性蛋白质图谱、超氧物歧化酶同工酶酶谱、酯酶同工酶酶谱、过氧化氢酶同工酶酶谱、过氧化物酶同工酶酶谱较正常植株有不同程度的变化，存在条带的减少和增加现象。8.85摘要再生植株和正常植株之间的基因组ISSR扩增图谱条带均有差异性，其中EMS、DES、5-BU诱变处理后再生植株的基因组扩增条带差异性较其他诱变剂的明显。关键词：寒兰；原球茎；化学诱变85AbstractABSTRACTUsingEMS,DES,colchicines,caffeine,5-BU,MH,Na2SO3asmut
5、agenicagents,andusingthePLBsofCymbidiumkanranMakinoasmaterial,westudiedthetech-niqueofmutageninvitro.Thisarticleresearchedtheeffectsongrowth,proliferationanddifferentiationofPLBstreatedwithmutagenicagents,chosedappropriateconcentrationandtime,usedtechniqueofmorphologictocheckupphenotypicmutatio
6、n,usedcytologicaltechniquetoobservetheinfluencesonkaryonsofroottip,analyzedthephysiologicalandbiochemicalchangeofplantsfromPLBstreatedwithmutagenicagents,atlast,usedISSR–PCRamplifiedsystemtoanalyzethechangeongenomeofplantsfromPLBstreatedwithmutagenicagents.Theresultswereasfollows:1.Eachmutageni
7、cagentcouldresrainthegrowthofPLBs,withtheincreaseofconcentrationandtheprolongedtime,thebrownratioanddeathratiorised,thebrownratiowerealwayslessthandeathratio.2.EachmutagenicagentscouldresraintheproliferationofPLBs,withtheincreaseo
