分子实验常用试剂、缓冲液配制

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1、分子实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1MTris-HCl组份浓度1MTris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。pH值浓HCl7.4约70mL7.6约60mL8.0约42mL4.将溶解定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2

2、、1.5MTris-HCl组份浓度1.5MTris-HCl（pH8.8）配制量1L配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调pH值至8.8。4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。3、10×TEBuffer组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L

3、配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500mMEDTA（pH8.0）20mL2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。4.室温保存。4、3M醋酸钠组份浓度3M醋酸钠（pH5.2）配制量100mL配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。3.加入去离子水将溶液定容至100mL。4.高温高压灭菌后

4、，室温保存。5、PBSBuffer组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4配制量1L配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。6、10M醋

5、酸铵组份浓度10M醋酸铵配制量100mL配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100～200mL烧杯中，加入约30mL的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100mL。3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。4.密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7、Tris-HCl平衡苯酚配置方法1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物

6、，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜

7、中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。③加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。④重复操作步骤③。⑤加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上

8、层水相。⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。8、苯酚/氯仿/异戊醇配置方法1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25：24：1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2.配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（2