临床研究医学论文范文汇总2010医学论

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1、食管癌组织微环境对树突状细胞的影响医学论文发表——创新医学网http://www.yixue360.com/　　作者：路静,刘康栋,赵明耀,杨洪艳,黄幼田,秦珍珠,白睿华,董子明*作者单位：(郑州大学基础医学院病理生理学教研室,河南郑州450052)　　【摘要】目的:探讨食管癌组织匀浆上清液体外模拟肿瘤微环境对人树突状细胞(DC)分化发育的影响,揭示肿瘤免疫逃逸机制,为DC疫苗的应用提供理论基础。方法:制备新鲜食管癌及癌旁组织匀浆上清液,ELISA检测其VEGFA含量。密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,含rhGMCSF和rhIL4RPM

2、I1640培养液诱导DC,第2天在继续诱导DC基础上设食管癌匀浆上清组、癌旁匀浆上清组、VEGFA组,均隔天半量换液,第4天加入食管癌细胞株EC9706抗原,第6天加入脂多糖,第8天收集各组细胞。观察DC形态,流式细胞术(FCM)检测免疫表型,RTPCR检测CD1a表达,CCK8检测T细胞增殖率及杀伤率。结果:食管癌组织匀浆上清VEGFA含量[(0.987±0.319)μg/L]明显高于癌旁[(0.152±0.105)μg/L,P<0.05];食管癌匀浆上清组细胞形态明显受到抑制,CD86分子阳性率(%)与正常DC相比由69±8降为42±

3、11、CD1a由56±12降为27±12、CD11c由21±13降为18±13(P<0.01),CD1a基因几乎无表达,刺激T细胞增殖率(%)由112.5±7.2降为70.2±3.5(P<0.01),杀伤率(%)由62.4±0.6降为46.8±1.6(P<0.01);癌旁匀浆上清液组、VEGFA组结果与正常DC组无统计学意义。结论:食管癌组织匀浆上清液所模拟的微环境对DC的诱导分化及其功能有明显的抑制作用,在该抑制作用中VEGFA并不起主要作用。　　【关键词】食管肿瘤;树突状细胞;匀浆上清;混合淋巴细胞反应;细胞毒性T细胞　　我国是食管癌高发

4、区,食管癌死亡率仅次于胃癌居第2位,食管癌的发生以及防治成为研究的热点。树突状细胞(dendriticcell,DC)是专职抗原提呈细胞,对于免疫反应的启动、进展以及免疫耐受的诱导起至关重要的作用[1,2]。然而在大多数肿瘤患者中,往往并不能产生DC介导的有效抗原提呈[3]。本研究小组及国内外其他学者应用体外大量扩增DC,然后用肿瘤抗原冲击后回输患者治疗肿瘤,取得一定效果[4-6]。研究肿瘤微环境下DC的功能,可更好地反映宿主的抗瘤免疫状态,了解其免疫逃逸机制。我们在体外以食管癌组织匀浆上清液模拟肿瘤微环境,探讨其对DC形态、表型及功能的影响及V

5、EGFA在其中的作用,为研究DC介导的肿瘤免疫治疗在食管癌患者中应用提供一定的理论基础。　　1材料和方法　　1.1材料重组人白细胞介素4(rhIL4)、重组人白介素2(rhIL2)购自Peprotech公司;重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGMCSF)购自厦门特宝生物公司;淋巴细胞分离液(Ficoll400,1077g/L)和胰蛋白酶购自天津TBD公司;完全培养基包括:RPMI1640购自美国Gibco公司,人血清来自健康捐献者自体血清,青链霉素各10万U/L;FITC标记的CD1a、CD86、CD11c、CD80、CD83及HL

6、ADR单克隆抗体(mAb)购自美国BD公司;RTPCR试剂盒购自TaKaRa公司;TRIzol购自美国Invitrogen公司;活细胞计数试剂盒CCK8(cellcountingkit8)购自日本同仁化学研究所;人VEGFAELISA试剂盒购自BenderMedSystems公司。人食管癌细胞株EC9706由中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室馈赠;外周血来自健康成人献血者,晨起空腹抽取肘静脉血。　　1.2方法　　1.2.1食管癌标本采集及匀浆制备取术前无化疗、放疗史患者手术切除的食管癌组织及距离癌组织5cm以外的癌旁组织各

7、15例,病理组织类型均为鳞癌,无淋巴结转移。标本存放于液氮罐,用于肿瘤组织匀浆制备。将食管癌及癌旁组织从液氮罐取出,缓慢复温。称取癌及癌旁组织各200mg,浸于青霉素、链霉素(浓度均为50万U/L)的生理盐水中20min,加入1mL生理盐水,调整匀浆浓度为200g/L,用组织匀浆研磨器缓慢进行组织研磨,4000r/min,30min,离心2次,弃去下层沉淀,留取上清液备用,保存于-20℃冰箱。　　1.2.2双抗体夹心ELISA法检测食管癌及癌旁组织匀浆上清液VEGFA蛋白水平按人VEGFAELISA试剂盒说明书要求进行具体操作。VEGFA标

8、准品依次倍比稀释并设复孔,每份癌及癌旁匀浆上清均设1复孔对照。应用SUNRISE酶标仪在波长450nm条件下,测各孔吸光度,取平均吸光度