《da培养基》word版

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1、gus基因存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶。β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此这个基因被广泛应用于基因调控的研究中。可作为GUS报告基因检测方法　　根据gus基因检测所用的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学法、分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检测法最高），其中最为常用的是组织化学法。　　组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸（X-Gluc）作为反应底物。将被检材料用含有底

2、物的缓冲液浸泡，若组织细胞发生了解gus基因的转化，并表达出Gus，在适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物，这是由其初始产物经氧化二聚作用于形成的靛蓝染料，它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性。因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚至单个细胞内的表达情况。　CTAB法的全称是十六烷基三甲基溴化铵法（HexadecyltrimethyAmmoniumBromide）。主要用于提取生物DNA步骤（1）2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。

3、　　（2）取少量实验材料（约300mg）置于研钵中，用液氮磨至粉状；　　（3）加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动；　　（4）将磨碎液分倒入1.5ml的灭菌离心管中，磨碎液的高度约占管的三分之二；　　（5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10min轻轻摇动，30~60min后取出；　　（6）冷却2min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3min（若提取的是总基因组，则不能剧烈震荡。），使两者混合均匀；　　（7）放入离心机中10000rpm离心10min，与此同时，将600ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心管

4、中；　　（8）10000rpm离心1min后，移液器轻轻地吸取上清夜，转入含有异丙醇的离心管内，将离心管慢慢上下摇动30sec，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物；　　（9）10000rpm离心1min后，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上；　　（10）60sec后，直立离心管，加入720ul的75%乙醇及80ul5M的醋酸钠，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中；　　（11）放置30min，使DNA块状物的不纯物溶解；　　（12）10000rpm离心1min后，倒掉液

5、体，再加入800ul75%的乙醇，将DNA再洗30min；　　（13）10000rpm离心30sec后，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后，直立离心管，干燥DNA（自然风干或用风筒吹干）；　　（14）加入50ul0.5×TE(含RNase)缓冲液，使DNA溶解，置于37℃恒温箱约15h，使RNA消解；以上为通用CTAB法,实验时可根据不同材料加以改进,以获得最佳实验结果.TEBuffer配制：10mmol/LTris-HCl(pH8.0)1mmol/LEDTA(pH8.0)因为含有以上两种物质，所以称为TE。作用：TE缓

6、冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液是保存.MD板上生长速度明显快于MM板的克隆为His+Muts,而MD板上生长速度与MM板上生长速度相当的克隆为His+Mut+甲醇利用正常型His+Mut+和His+Muts的菌的生长状态不同的根本原因。如果没有记错的话只是对甲醇的利用能力不同，所以，在MD板子上，由于加入的是葡萄糖，所有的菌生长状态应该是一样，为什么你有三个菌长的慢可能是你再转接的时候点上去的菌量少。对于MM板，由于加入甲醇作为碳

7、源，所以利用能力强的菌His+Mut+会先长出来，理论上就是和在MD板子上涨的速度一致，实际上MM上的菌总体都会比MD上的长的慢。而His+Muts型的菌长得非常慢，有时候甚至几乎在MM板上好像就没长。所以，你要好好观察MM板上的菌，长得比较大的应该就是His+Mut+。处方药所谓处方药是指需经过医生处方才能从药房或药店得到并要在医生监控或指导下使用的药物。国际上通常用PrescriptionDrug.表示，简称R（即医生处方左上角常见到的R）。处方药一般包括：刚上市的新药：对其活性、副作用还要进一步观察；可产生依赖性的某些药物：如吗啡

8、类镇痛药及某些催眠安定药物等；药物本身毒性较大：如抗癌药物等；某些疾病必须由医生和实验室进行确诊，使用药物需医生处方，并在医生指导下使用，如心血管疾病药物等。非处方药与处方药相对，非处方药是指那些消费者不需