《ae缓冲液》word版

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1、TAE缓冲液：电泳缓冲液Tris-乙酸TAE缓冲液成分及终浓度：　　1、2mol/LTris碱　　2、1mol/L乙酸　　3、100mmol/LEDTA　　4、水配制1L的50×TAE缓冲液各成分用量：　　1、Tris碱（242g）　　2、冰乙酸（57.1ml）　　3、EDTA【200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）】　　4、水（补足1L）50×TAE缓冲液的配制方法：　　称下列试剂，1L烧杯　　Tris                             242g　　Na2EDTA.2H2O   37.2g　　然后加入800ml的去离子水，充分搅拌溶解。　　加入57.1ml

2、的醋酸，充分混匀。　　加去离子水定容至1L，室温保存。AE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 loadingbuffer　loadingbuffer的中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带，前面的蓝色的条带是溴酚蓝，代表的片段大

3、小是300bp，后面的有点绿色的条带是二甲苯青，代表的片段大小在4000bp左右。　　loadingbuffer的功能主要有两个。第一，里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液，加loading100℃加热，也是为了中止酶促反应，防止提取的蛋白质降解。　　6×loadingbuffer一般配置：　　

4、6×Loadingbuffer:　　30mMEDTA　　36%(v/v)Glycerol（甘油）　　0.05%(w/v)XyleneCyanolFF（二甲苯青FF)　　0.05%(w/v)BromophenolBLUE(溴酚蓝)　　5×SDS-PAGELoadingBuffer配制方法　　组份浓度：　　250mMTris-HCl（pH6.8）　　10％（W/V）SDS　　0.5％（W/V）BPB　　50％（V/V）甘油　　5％（W/V）β-巯基乙醇　　配制量：5mL　　配制方法：　　1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。　　1MTris-HCl1.25mL　　SDS　0.5g　　BPB

5、　25mg　　甘油2.5mL　　2.加入去离子水溶解后定容至5mL。　　3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。　　4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。5.加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右1.生物学的聚合酶链式反应定义　　聚合酶链式反应简称PCR（英文全称：PolymeraseChainReaction），  聚合酶链式反应具体内容点击： 聚合酶链式反应，简称PCR。聚合酶链式反应，其英文PolymeaseChainReaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使

6、目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病病的诊断或任何有DNA,RNA的地方．聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction，简称PCR）又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。由美国科学家PE（PerkinElmer珀金-埃尔默）公司遗传部的Dr.Mullis发明，由于PCRPCR技术在理论和应用上的跨时代意义，因此Mullis获得了1993年诺贝尔化学奖。技术原理　　DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，

7、在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在  聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。　　但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技