fge凝胶成像观察

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1、凝胶定量软件QuantityOne使用简介1内容简介凝胶电泳是每个做分子生物学的同学天天都要打交道的基本技术。电泳之后的信息处理与电泳本身同样重要。目前有大量软件可以用于分析电泳结果，比较有名的比如BandScan、BandLeader、SigmaGel等等。今天要向大家介绍的是来自Bio-Rad的1D凝胶定量软件QuantityOne（Bio-Rad还有一个做2D凝胶分析的软件PDQuest）。这个软件的最新版本可以在Bio-Rad的主页免费下载。2QuantityOne的定量方法QuantityOne的分析功能顾名思义主

2、要用来进行凝胶或者培养皿的荧光定量分析。它的分析功能或者说分析方式主要有4种：泳道/条带轨迹定量法；等高线直接定量法；菌落计数；分子量测定--------------------------------------------------------------------------------这三种方法中使用最为方便也是最为广泛的应该是等高线定量法（VolumnContour）。它通过半自动描绘电泳条带的等高线边缘来得到等高线区域内部面积，再将该面积乘以区域内平均光密度值得到条带内部总的信号量。当然这种分析方法的弊病显而

3、易见：无法同等得排除不同泳道的背景亮度；等高线的绘制处于“半自动”状态，即需要人为判断作为等高线标准的电泳条带的边缘；最致命的是在几个电泳条带距离十分接近的时候几乎无法绘制单一条带的轮廓（常出现连续的几个条带等高线相连而无法分离出单独条带的轮廓）。三种方法中个人感觉最为科学和严谨的应该是泳道/条带轨迹定量法（TraceTracking）。这种方法使用起来步骤较为繁琐，必须通过泳道识别---电泳条带识别两个连续的步骤才能进行定量。然而这种方式的最大优点在于它可以完全抛弃人为主观因素进行全自动定量。他的定量方式为：首先根据不同电

4、泳条带的光密度值绘制光密度曲线，然后计算光密度曲线下面积作为电泳条带的定量根据。大家可能会问他能不能排除泳道背景？答案是肯定的，它能够最大程度的排除不同泳道之间的背景差异，让各个泳道上的不同电泳条带在一条几乎相同的起跑线上进行对比。这个背景排除功能是等高线法无法做到的（等高线法也有基本的背景排除办法，但是和泳道/条带轨迹定量法的背景排除不是一个等级的。等高线法只能排除同一泳道上的背景，而不能均等的排除不同泳道的背景）。另外泳道/条带轨迹定量法还可以结合GaussModelBands对紧密相连的电泳条带进行分析，而这种条带也是

5、等高线法无法分析的。我们此次重点学习这个方法。第三个分析功能是菌落计数（ColonyCounting）。这个功能其实很实用，可以分析蓝白筛选的结果。但是很奇怪我的电脑居然无法运行这个功能，因此无法向大家介绍了。另外QuantityOne还可以通过回归曲线测定3QuantityOne的基本常用菜单操作下面让我们了解一下QuantityOne常用的基本菜单操作。--------------------------------------------------------------------------------打开文件：

6、由于QuantityOne是Bio-Rad的硬件配套软件，因此QuantityOne可以自动输入来自Bio-Rad公司的凝胶分析仪的数据。具体支持哪些硬件大家可以在“Edit-Preference-Imagers”里面设置。如果您的实验室没有采用Bio-Rad的硬件设施也没关系。您只要将电泳图片用ACDSee等程序转换为TIF图片格式就可以被QuantityOne识别了。注意QuantityOne只支持8位和16位灰度的TIF文件。PHP代码:QuantityOne似乎有一个小bug，就是在按“Open”之后并没有立刻弹出资

7、源管理器让你选择目标文件的位置。其实你只要将鼠标在屏幕右下方点击一下，资源管理器就会乖乖弹出来了.PHP代码:QuantityOne只能分析白色背景+黑色条带的电泳图。而我们正常情况下得到的一般都是黑色背景+白色条带的电泳图。我们可以在“Image-Invertdata中将图片色彩进行反转，然后便可以用QuantityOne进行分析了.文字注释：QuantityOne提供基本的文字注释功能。您可以在您的电泳图片上记录您的分析结果比如电泳条带的分子量、光密度值、物质的量等等。这个功能可以通过“Edit-TextOverlayT

8、ools”来实现。在弹出的浮动工具栏中选择“ABC”或者“”就可以进行文字输入和画标记线的操作。光密度工具：在“View-PlotDensity”的下级菜单中大家会见到几个和电泳条带光密度值相关的显示选项。大家可以分别选择不同的选项感受一下它们之间的差别。选择方法是点击相应的下级菜单比如“