金华十校联考、金丽衢联考）请回答与α-淀粉酶

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1、1.（一）（改编自2015天津理综、“金华十校”联考、“金丽衢”联考）请回答与“α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用检测”的有关问题：（1）在工业化生产中，酶的固定化有多种方法，例如共价偶联法和吸附法。与吸附法相比，共价偶联法对α-淀粉酶活性的影响▲（更大/更小/差不多/无法确定）。（2）在该实验中，固相淀粉酶水解淀粉的鉴定试验结果为：①淀粉溶液加指示剂呈蓝色；②▲加指示剂呈红色。（3）枯草芽孢杆菌也是制备蛋白酶的良好原料，为筛选枯草芽孢杆菌的蛋白酶高产菌株，将分别浸过不同菌株的分泌物提取液（a~e）及无菌水（f）的无菌圆纸片置于含某种高浓度蛋白质的平板培养基表面，在37℃恒温培养箱中

2、放置2~3天，结果如右图所示。圆纸片b周围没有形成明显清晰区的原因是▲（答对两点即可）。若要保存菌株a，可将其接种至保藏斜面上，培养后置于4℃冰箱中保存。在后续取用之前要先将菌种恢复至室温并进行两次传代培养，此操作的目的是▲。下列不是制备枯草芽孢杆菌固体蛋白酶的工艺步骤的是（▲）A.过滤B.干燥C.破碎D.浓缩（4）纯化后的α-淀粉酶可用电泳法检测其相对分子量大小。在相同条件下，带电荷量相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量越▲。（5）相对于唾液淀粉酶，枯草杆菌产生的α-淀粉酶具有▲特性而有利于工业生产。（二）（改编自镇海中学模拟题）人肌红蛋白（Myo）是早期诊断急性心肌梗塞的生化

3、标志物之一。为制备抗Myo的单克隆抗体，科研人员进行了有关研究。（1）科研人员以Myo作为抗原免疫小鼠，取小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞诱导融合并用选择培养基筛选融合细胞。在培养能产生抗体的阳性细胞时需降低培养液血清浓度的原因是▲。最终得到▲细胞，该细胞具有▲（A.一个细胞核、同源二倍体核型B.一个细胞核、异源四倍体核型C.两个细胞核、同源二倍体核型D.两个细胞核、异源四倍体核型）。（2）双抗体夹心法是医学上常用的定量检测抗原的方法，具体原理如下图：固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，这是由于单抗可以识别抗原分子的▲。该检测方法中，酶标抗体的作用是▲。（3）研究人员获得三种Myo单克隆抗

4、体，分别标记为A、B、C。为检测它们之中哪两种适合用于双抗体夹心法，科研人员至少需进行▲组实验，检测并比较各组实验的▲。2.（一）请回答下列酵母菌的有关问题（1）若要对某液体内的酵母菌进行计数，可采用涂布分离法，而此法统计的结果往往较实际值偏低，原因可能是（写出一点即可）▲（2）对于频繁使用的酵母菌菌种可以将试管放入▲保存（3）酵母菌可以用于制果酒，需要将葡萄浆放入发酵瓶中，但装量不能超过2/3，原因是（写出两点即可）▲。发酵完毕后将发酵液用两层纱布过滤，将获得的滤液加盖密封，静置。待沉淀后，▲即为葡萄酒（4）假丝酵母是一种酵母菌，可用于生产泡菜，发酵产物中有亚硝酸，亚硝酸盐与对氨

5、基苯磺酸发生重氮化反应后的产物与N-1-萘基乙二胺▲，形成紫红色产物（5）测定光密度值时，取10ml样品溶液，加入4.5ml氯化铵缓冲液、2.5ml▲溶液和5ml显色液,定容后混匀。若测得OD值偏大，则应▲A.增大光的波长，光程不变B.减小光的波长，光程不变C.增大光程，光的波长不变D.减小光程，光的波长不变（二）下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料：资料1：巴斯德毕赤酵母菌可用培养基中甲醇作为其生活的唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达[5’AOX1和3’AOX1（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子]资料2

6、：巴斯德毕赤酵母菌内无天然质粒，所以改造出了图1所示的pPIC9K质粒作为载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合到染色体中进行表达资料3：启动子是RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列，终止子是给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列请你回答下列有关问题：（1）该实验中可使用双酶切获得HBsAg基因，双酶切的优点有（写出一点即可）▲（2）用DNA连接酶将切割后的HBsAg基因和pPIC9K质粒连接成重组质粒，导入大肠杆菌体内，这样做的目的是▲（3）如果用限制性核酸内切酶SnaBI、AvrII、SacI对图中质粒进行切割，用一

7、种酶、两种酶和三种酶分别切割时形成的DNA片段种类与用一种酶和两种酶分别切割时形成的DNA片段种类▲（填“相同”或“不同”）（4）右图为HBsAg某DNA片段一条链的碱基排列顺序。其中图1的碱基序列已经解读，其顺序是GGTTATGCGT,请你解读图2的碱基排列顺序▲（5）写出质粒载体作为基因工程的工具，应具备的条件（写出两个即可）▲（6）该酵母菌可用于降解工业废水中的甲醇，这属于▲的生态工程，而有些农村地区将农作物秸秆发酵处理，利用沼气作为能源属于▲的生态工程。3（一