资源描述：
《现代仪器分析--论文正稿》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、WORD格式整理仪器分析结课论课题：高效液相色谱法研究系别：生物工程系专业：生物制药技术班级：制药1432班学号：201407043240姓名：高慧芳指导老师：王绍良学习参考资料分享WORD格式整理高效液相色谱法研究摘要：高效液相色谱法，也称高压液相色谱法。它是在经典的液相柱色谱的基础上发展而成的一种高效、快速、高灵敏的色谱分离方法。根据柱内填料的不同及不同的分离机制，可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱及凝胶色谱。由于采用了高效填充剂，并配以高压输液泵、高灵敏检测器、自动记录装置及自动收集装置，使高效液相色谱法的分离速度及效率均大大提
2、高，更趋于仪器化、自动化，且使用范围广。制备型的HPLC能大量分离制备较纯的样品。随着计算机技术的不断发展，HPLC与质谱、核磁共振谱、红外光谱等波谱技术的联用进展加快。关键字：液相色谱；分类；应用背景：1903年俄国植物化学家茨维特首次提出“色谱法”和“色谱图”的概念。茨维特使用色谱法chromatography来描述他的彩色试验。他在论文中写到：植物色素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯石油醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管内观察到它们相应的色带，就象光谱一样，称之为色谱图。”一、高效液相色谱
3、法分类根据分离机理可分为：吸附色谱、键合相色谱、离子交换色谱、大小排阻（凝胶）色谱、液-液分配色谱法。1、吸附色谱分离吸附色谱法是当组分分子流经固定相（吸附剂，如硅胶或氧化铝）时，不同组分分子、流动相分子就要对吸附剂表面的活性中心展开竞争。这种竞争能力的大小，决定了保留值大小，即被活性中心吸附得越牢的分子，保留值越大。2、键合相色谱分离键合相色谱法是将类似于气相色谱中的固定液的液体，通过化学反应键合到硅胶表面，从而形成固定相。采用化学键合固定相的色谱法称为键合相色谱。若采用极性键合相、非极性流动相，则称为正相色谱；采用非极性键合相、极性流
4、动相，则称为反相色谱。这种分离的保留值大小，主要决定于组分分子与键合固定液分子间作用力的大小。3、离子交换色谱分离学习参考资料分享WORD格式整理离子交换色谱法是流动相中的被分离离子，与作为固定相的离子交换剂上的平衡离子进行可逆交换时，它们对交换剂的基体离子亲和力大小的不同而达到分离的。组分离子对交换剂基体离子亲和力越大，保留时间就越长。4、大小排阻色谱分离大小排阻色谱法的固定相是一类孔径大小有一定范围的多孔材料。被分离的分子大小不同，它们扩散渗入多孔材料的容易程度不同。小分子最易扩散进入细孔中，保留时间最长；大分子完全排斥在孔外，随流动
5、相很快流出，保留时间最短。5、液-液分配色谱法分离液-液分配色谱的固定相和流动相是互不相溶的两种溶剂,分离时,组分溶入两相,不同的组分因分配系数(K)的不同而被分离.目前广泛使用的化学键合固定相是将固定液的官能团键合在载体上而制成的,使用化学键合固定相的色谱方法(简称键合相色谱法)可以用分配色谱的原理加以解释.键合相色谱法在HPLC中占有极其重要的地位,是应用最广的色谱法.按照固定相和流动相极性的不同,分配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法两类.二、高效液相色谱仪简介高效液相色谱仪主要由：输液系统、进样系统、色谱柱系统、检测系统、数据记
6、录处理系统等组成。1、输液泵：高效液相色谱的流动相采用高压泵输送,有不同类型的输液泵,按输液性质可分为恒压泵和恒流泵.目前使用较多的是柱塞式往复泵。2、进样器：学习参考资料分享WORD格式整理进样器是将试样送入色谱柱的装置.一般要求进样装置的密封性好,死体积小,重复性好,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力,流量影响小。3、色谱柱：色谱柱是色谱分离的核心.为了保证色谱柱的柱效高,使用寿命长,一般使用由专业化工厂生产的商品柱.色谱柱管多由不锈钢制成,内装一定的固定相.色谱往长一般10～30cm,内径2～5mm.化学键合相是广泛使用的固定相,
7、其中又以十八烷基硅烷键合硅胶的应用最为广泛。4、检测器：样品经色谱柱分离后进入检侧器进行检测.按其适用范围检测器可分为通用型和专属型两大类,专属型检测器只能检测某些组分的某一性质,紫外检测器(UVD),荧光检测器(ED)属于这一类,它们只对有紫外吸收或荧光发射的组分有响应;通用型检测器检测的是一般物质均具有的性质,示差折光检测器(RID),蒸发光散射检测器(ELSD)等.液相色谱-质谱联用(LC-MS)则是用质谱作为高效液相色谱的检测器。5、数据记录处理和计算机控制系统:现代HPLC的特征是用微机控制仪器.HPLC仪器的中心计算机控制系统
8、,即能做数据采集和分析工作,又能程序控制仪器的各个部件,还能在分析一个试样之后自动改变条件而进行下一个试样的分析,许多色谱仪的软件系统具有方法认证功能,使分析工作更加规范化.三、高效液相色谱的
