反刍动物源枯草芽孢杆菌的分离与鉴定

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1、青岛农业大学毕业论文题目：反刍动物源性枯草芽孢杆菌的分离与鉴定姓名：学院：动物科技学院专业：动物医学班级：1001学号：20105254指导教师：温建新2014年6月5日16反刍动物源性枯草芽孢杆菌的分离与鉴定动物医学专业袁如意指导教师温建新摘要：从健康荷斯坦成年奶牛新鲜粪便中分离纯化出1株疑似芽孢杆菌属菌株，编号为K。对该菌株进行形态学观察、生化试验、药敏试验及安全性试验等。试验结果表明，该菌菌体革兰氏染色阳性，芽孢染色为绿色，呈长杆状，芽孢中生，椭圆；能发酵糖醇，吲哚试验阳性，触媒试验阳性，能产生淀粉酶，并且可以液化明胶，生化试验结果表明K菌为枯草芽孢杆菌；

2、该菌对链霉素、青霉素、诺氟沙星、四环素耐药性强，而对庆大霉素、卡那霉素、环丙沙星等抗生素表现敏感；动物安全试验表明，灌服浓度为1011cfu/mL菌液的小鼠精神状态良好，无死亡现象。本试验为获得反刍动物的有益菌种及研制反刍动物微生态制剂奠定基础。关键词：反刍动物；枯草芽孢杆菌；分离；鉴定16IsolationandIdentificationofBacillussubtilisStrainsfromRuminantsStudentmajoringinveterinarymedicineYuanRuyiTutorWenJianxinAbstract：Onebaci

3、llusstrainwasisolatedandpurifiedfromthefaecesofhealthyHolsteinnamedK.Morphologicalobservation,biochemicaltests,chemosensitivitytestandsecurityexperimentwereconducted.ExperimentalresultsshowedthatstrainKGramstainwaspositive,sporestainingwasgreen.Itsshapewasalongrod-shapedbacteria,ands

4、poreswasoval.Commonsugaralcoholscouldbefermented;Indoletestwaspositive;Catalysttestwaspositive;Itcouldproduceamylase;Italsocouldliquefygelatin.Susceptibilitytestingshowedthatthebacteriastronglyresistedtostreptomycin,penicillin,norfloxacin,andtetracyclineandthatitwassensitivetogentami

5、cin,kanamycinandciprofloxacin.AnimalsafetytrialsshowedthatMicefedbacterias1011cfu/mLwereingoodconditionandnomortality.therefore,theKwasidentifiedasBacillussubtilisstrain.Soitprovidedtheoreticalbasisfordevelopingprobioticpreparations.Keywords:ruminants;BacillusSubtilis;isolation;ident

6、ification16引言枯草芽孢杆菌是存在于动物肠道中的非致病需氧菌[1]，可降低肠道内氧浓度，产生的枯草菌素、多粘菌素、短杆菌肽等活性物质能显著降低肠道内大肠杆菌、沙门氏菌的数量，减少机体内致病菌[2]，改善了乳酸杆菌等厌氧菌的生长环境，增加有益菌，以此来保持肠道菌群的平衡，提高动物机体抗病能力。同时枯草芽孢杆菌具有耐受高温、耐酸、耐挤压等特点，在饲料加工和储存过程中不易失活[3-5]。枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用，可将淀粉转化为单糖，能提高动物对饲料中营养的消化和吸收率；其还

7、能产生多种营养物质如维生素、氨基酸、促生长因子等，参加机体新陈代谢，利于动物机体吸收，使动物保持健康状态；还具有降解碳水化合物的酶如纤维素酶、葡聚糖酶[6-7]。枯草芽孢杆菌在养殖业中发挥了巨大作用，并且已经得到广泛的应用。针对鸡、猪、水产等已有大量报道，丁祥力等利用枯草芽孢杆菌WH-5净化水产养殖厂的水[10]，魏姗姗等从健康仔猪空肠黏膜分离到23株对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有拮抗作用的芽孢杆菌[11]，虽然枯草芽孢杆菌作为微生态制剂在反刍动物中还没有广泛应用，但近年来，枯草芽孢杆菌作为微生态制剂在反刍动物养殖中的研究越来越多。本试验从健康奶牛粪便中分离鉴定枯

8、草芽孢杆菌，以期为进一步