rahnella sppjt09胞外多糖的发酵条件与结构分析

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1、谨以此论文献给我的恩师、同学和家人!郭静独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：力咖年箩月当徊学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事项：1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交

2、论文的复印件和磁盘，允许‘论文被查阅和借阅。2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：导师签字：F确扔签字日期：驯。年歹月珈日签字日期：年月Rahnellasp．PJT09胞外多糖的发酵条件与结构分析Rahnei

3、lasp．PJT09胞外多糖的发酵条件与结构分析摘要细菌胞外多糖的微生物来源非常广泛，革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均可以产生胞外多糖。因此，寻找细菌胞外多糖高产菌株并对其进行培养条件优化以提高产量，对多糖的工业化生产非常重要。菌种和培养条件是影响胞外多糖产量和组分的主要因素。产糖菌株对于温度、pH、发酵时间、碳源和氮源等许多因素比较敏感，故本论文筛选并鉴定了一株胞外多糖高产菌株，并对菌株产糖培养基和发酵条件进行了研究，采用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、1DNMR和2DNMR技术对其平均分子量及结构进行了分

4、析。本论文主要研究内容如下：1．从大型真菌子实体中筛选得到一株胞外多糖高产菌株PJT09，经16SrDNA鉴定为Rahnella(拉恩氏菌属)。2．由单因素实验和响应面法确定了gahnellasp．PJT09菌株最适产糖的发酵培养基组成为(g／L)-蔗糖40，酵母膏5，NaCl1．5，ZnCl20．3，K2HP041；在此基础上由单因素试验确定了最佳发酵条件为：每250mL三角瓶装液量为100mL，接种量为3％(v／v)，初始pH值为6．0，28℃，160r／min培养70h。在此营养和发酵条件下，Rah

5、nellasp．PJT09多糖产量为24．059／L，转化率达到64％。3．确定了Rahnellasp．PJT09菌株胞外多糖的最佳提取工艺为：将发酵液调浓缩至原来的1／2，浓缩液调pH8．0，再加入2倍95％乙醇沉淀多糖，然后用去离子水复溶后再沉淀，得到胞外多糖粗品。经SephacrylS-300HR凝胶柱层析分离纯化后得到纯多糖P09。由高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)确定了P09的重均分子量为320kDa。4．经1DNMR和2DNMR技术进行了多糖结构分析，确定了P09为13．(2，6)．D．Fru

6、f(1evan型果聚糖)。Rahnellasp．PJT09具有易培养，营养要求简单，发酵周期短、果聚糖产量高、生产成本低等特点，具备工业化大规模生产的优良特性。本论文的研究为果聚糖的生物活性、构效关系及开发应用的研究提供了一定的理论基础。关键词：Rahnella；胞外多糖；发酵；结构；果聚糖Rahnellasp．PJT09胞外多糖的发酵条件与结构分析ThefermentationconditionsofexopolysaccharideproducingfromRahnellasp．PJT09andthe

7、structuralanalysisAbstractBacterialexopolysaccharides(EPS)haveawidemicrobalsources，bothGram—negativebacterialandGram—positivebacterialcailprouduceEPS．SearchingforEPShi曲productionbacterialandoptimizingthecultivationconditionstoimprovetheproductionyieldisve

8、ryimportanttotheindustrialproductionforEPS．ThestrainandcultureconditionsinfluencetheanaountandthecompositionofEPS．TheproductionofEPSissensitivetomanyfactorssuchastemperature，pH，incubationperiods，carbonsourcesandnitr