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时间:2018-12-08
《zwittermicin a对cry1ac杀虫作用增效机理的初步研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、摘要ZwittermicinA(ZwA)是由蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus,Be)和苏云金杆菌产生的一种新型广谱的抗生素,是已知唯一的线性氨基多元醇类抗生素,该抗生素对多种真核微生物和原核微生物有抑制作用,对苏云金杆菌杀虫晶体蛋CrylAe的杀虫活性具有增效作用,但作用机理尚不清楚。本研究分别从组织病理学、分子生物学及生物化学角度对zwA的增效机理进行了初步研究。首先利用等电点沉淀法提取CrylAe蛋白,通过ZwA与CrylAc蛋白分别和共同饲喂甜菜夜蛾幼虫(SpodopteraexiguaHiib
2、ner,&exigua),证明了ZwA的杀虫增效活性。用CrylAc蛋白单独饲喂甜菜夜蛾初孵幼虫,体重抑制活性明显,杀虫活性较低;单独用ZwA处理时无杀虫活性。当ZwA浓度为0.1ing/mE、CrylAc浓度为lmg/mL时,48h校正死亡率达90%。对甜菜夜蛾五龄幼虫进行生物测定,当用2599ZwA和51xgCrylAe分别饲喂试虫时,无杀虫活性;用25I-tgZwA和51xgCrylAc同时饲喂试虫时,84hJ式虫全部死亡。对甜菜夜蛾五龄幼虫中肠组织切片分析发现,幼虫口服251xgZwA和51xgCryl
3、Ac的幼虫12h时,中肠变细小,中肠壁变厚,且有裂解现象,围食膜无法正常形成;24h和36h时中肠壁逐渐恢复正常,围食膜重新形成,食物量增多。体外条件下,用等量的1%ZwA和1%几丁质亲和分子(Calcofluor)分别处理甜菜夜蛾围食膜,Calcofluor可以明显促进围食膜蛋白从围食膜几丁质原纤丝上解离下来,而ZwA无此作用。通过BAEE法测定ZwA对Trypsin活力的影响,结果表明Z、ⅣA对Trypsin活力无影响,并且ZwA对Trypsin活化CrylAe蛋白的过程也无影响。初步推测,ZwA的作用位点
4、应位于甜菜夜蛾幼虫的中肠壁上。关键词:ZwittermicinA:CrylAc;中肠;围食膜;Calcofluor;酶活性studyOilEnhanementofZwittermicinAtoCrylAeAgainstSpodopteraexiguaH矗bnerAuthor:JingLiSupervisor:.Prof.WeiGuoMajor:.AgricdmreEntomologyandPestControlAbstractZwittermicinA(ZwA)isalinearaminopolyolantib
5、ioticproducedbyBacilluscereus(Bc)andBacillusthuringiensis(BOwithbroadspectnms,anditinhibitsmanyeukaryotesandprokaryotes.ZwAcanenhancethetoxicityofBtCrylAcprotein.butthemechanismwasstillunhowlLInthisstudy,wedidsomeprimaryresearchabouthistopathology,molecularb
6、iologyandbiochemistryonthemechanismoftheenhancement.CrylAcproteinwasextractedbypHdependentpr晒pitationmethod.ThenfeededSpodopteraexiguaHiibner@ex/gua)larvae、析ⅡlZwAandCrylAcseparatelyandcorporatelytoimprovetheenhancement.Themortalitywas90%at48hafterS.ex/gualar
7、vaeweretreatedwithCrylAcinthepresenceofZwA,whichWashigherthanthatwithoutZwA.Allthe5th-instarlarvaeweredeadat84hafterfedwith51xgofCryIAcplus25甥ofZwA(perlarvae).Microscopicalobservationofdissectedmidgutshowedthatat12hpostfeedingwith5鹇CrylAcand251xgZwAnoPMwerep
8、resentinthetreatedlarvae,incontrasttothepresenceofafullyformedPMinthemidgutofcontrollarvae.Butafter36h,themidgutdisplayednormalandPMformedagain.Afterbeingtreatedby1%ZwAandCalcofluorindividuallyi
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