zwittermicin a对cry1ac杀虫作用增效机理的初步研究

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1、摘要ZwittermicinA(ZwA)是由蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus，Be)和苏云金杆菌产生的一种新型广谱的抗生素，是已知唯一的线性氨基多元醇类抗生素，该抗生素对多种真核微生物和原核微生物有抑制作用，对苏云金杆菌杀虫晶体蛋CrylAe的杀虫活性具有增效作用，但作用机理尚不清楚。本研究分别从组织病理学、分子生物学及生物化学角度对zwA的增效机理进行了初步研究。首先利用等电点沉淀法提取CrylAe蛋白，通过ZwA与CrylAc蛋白分别和共同饲喂甜菜夜蛾幼虫(SpodopteraexiguaHiib

2、ner，&exigua)，证明了ZwA的杀虫增效活性。用CrylAc蛋白单独饲喂甜菜夜蛾初孵幼虫，体重抑制活性明显，杀虫活性较低；单独用ZwA处理时无杀虫活性。当ZwA浓度为0．1ing／mE、CrylAc浓度为lmg／mL时，48h校正死亡率达90％。对甜菜夜蛾五龄幼虫进行生物测定，当用2599ZwA和51xgCrylAe分别饲喂试虫时，无杀虫活性；用25I-tgZwA和51xgCrylAc同时饲喂试虫时，84hJ式虫全部死亡。对甜菜夜蛾五龄幼虫中肠组织切片分析发现，幼虫口服251xgZwA和51xgCryl

3、Ac的幼虫12h时，中肠变细小，中肠壁变厚，且有裂解现象，围食膜无法正常形成；24h和36h时中肠壁逐渐恢复正常，围食膜重新形成，食物量增多。体外条件下，用等量的1％ZwA和1％几丁质亲和分子(Calcofluor)分别处理甜菜夜蛾围食膜，Calcofluor可以明显促进围食膜蛋白从围食膜几丁质原纤丝上解离下来，而ZwA无此作用。通过BAEE法测定ZwA对Trypsin活力的影响，结果表明Z、ⅣA对Trypsin活力无影响，并且ZwA对Trypsin活化CrylAe蛋白的过程也无影响。初步推测，ZwA的作用位点

4、应位于甜菜夜蛾幼虫的中肠壁上。关键词：ZwittermicinA：CrylAc；中肠；围食膜；Calcofluor；酶活性studyOilEnhanementofZwittermicinAtoCrylAeAgainstSpodopteraexiguaH矗bnerAuthor：JingLiSupervisor：．Prof．WeiGuoMajor：．AgricdmreEntomologyandPestControlAbstractZwittermicinA(ZwA)isalinearaminopolyolantib

5、ioticproducedbyBacilluscereus(Bc)andBacillusthuringiensis(BOwithbroadspectnms，anditinhibitsmanyeukaryotesandprokaryotes．ZwAcanenhancethetoxicityofBtCrylAcprotein．butthemechanismwasstillunhowlLInthisstudy,wedidsomeprimaryresearchabouthistopathology,molecularb

6、iologyandbiochemistryonthemechanismoftheenhancement．CrylAcproteinwasextractedbypHdependentpr晒pitationmethod．ThenfeededSpodopteraexiguaHiibner@ex／gua)larvae、析ⅡlZwAandCrylAcseparatelyandcorporatelytoimprovetheenhancement．Themortalitywas90％at48hafterS．ex／gualar

7、vaeweretreatedwithCrylAcinthepresenceofZwA，whichWashigherthanthatwithoutZwA．Allthe5th-instarlarvaeweredeadat84hafterfedwith51xgofCryIAcplus25甥ofZwA(perlarvae)．Microscopicalobservationofdissectedmidgutshowedthatat12hpostfeedingwith5鹇CrylAcand251xgZwAnoPMwerep

8、resentinthetreatedlarvae,incontrasttothepresenceofafullyformedPMinthemidgutofcontrollarvae．Butafter36h,themidgutdisplayednormalandPMformedagain．Afterbeingtreatedby1％ZwAandCalcofluorindividuallyi