不同菌核病sclerotinia sclerotiorum分离物的形态学 致病性和遗传多样性研究

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1、—:堕窒业大学博主鲨苎中文摘要摘要核盘菌Sclerotiniasclerotiorum(Lib)deBary是一种放线状子囊真菌,其寄主范围和地理分布十分广泛,是一种相当严重的世界性植物真菌病害。本研究的主要目的是对不同地区和不同寄主来源的菌核病分离物群体进行形态学、生物化学、致病性和遗传多样性鉴定,以期获得不同菌核病分离物的主要特性差异,为菌核病的系统发育研究和抗性育种提供理论基础。从中国、加拿大、波兰、匈矛利、俄罗斯和斯洛伐克六个国家的三个不同寄主(油菜、胡萝h和向日葵)上分离了218个菌核病分离物。其中来自中国、加拿大和俄罗斯的分离物是从菌核分离

2、的;来自波兰、匈牙利和斯洛伐克的分离物是利用菌丝体继代培养获得。在PDA固体培养基(O=18.5cm)上,对48个菌核病分离物的生长速率和形态学特性进行检测,显示不同地区和寄主来源的大部分菌核病分离物的生长速率都非常快,但不同群体间的平均生长速率显著不同(,

3、同地区的个体或群体的形态学特性基本相似。就群体而言,不同群体问的菌核干重(P(O.01)、菌核鲜重(P

4、P<0.05)均显著或极显著不同。相关分析显示不同形态学指标之间的相关性明显不同。生长速率与菌核干重呈显著正相关(r=O.30*);菌核鲜重与干重和单个菌核重量呈极显著正相关(,=0,81{+和0.73+··);而菌核数量和单个菌核重量呈极显著负相关(,=--0.60·+·),表明在一定的培养时间内,随着菌核病菌落的逐渐生长,产生菌核的数量、重量也逐渐增加,但菌核的数

5、量越多.单个菌核的重量也相应降低。采用HPLC技术检测草酸分泌量,显示不同分离物分泌的草酸浓度不同。相关性分析发现离体条件F草酸分泌量与生长速率呈负相关(,=一O.403);与茵核干重和鲜重呈正相关(干重r=0.424;鲜重r=0.436),但均未达到显著水平;与pH值呈显著负相关(r=-0.517+).表明在一定范围内,pH值差异可以作为一种草酸含量检测和致病性鉴定的初步参考指标。在两个试验站间(Borowo和Cezekwica),利用9个菌核病菌株对110个油菜品种(系)进行病情指数(DSI)和病斑长度的综合评价,发现试验站间、菌株间和品种群体间的

6、病情指数和病斑长度极显著不同(P

7、群体结构进行20对RAPD引物分析,显示菌核病分离物的遗传相似性相当高,物种水平的Nei基因多样度h=0.197,Shannon多样性指数,=0.300。UPGMA分析显示·同一地区的大部分个体都聚在相同组或相邻组内。中国合肥群体内的个体遗传基础十分相似,但与其他群体遗传差异较大;加拿大群体与波兰群体的遗传距离较近。不同寄主来源与相似性聚类分组相关性不大。分子方差(AMOVA)分析显示群体间变异组分占50.62%,群体内变异占49.38%,且均达到极显著水平(尸

8、传变异为22.94%;基因流(^砌)为1.68,说明群体间的基因交流和互作相对较高。从中国安徽省和青海省的油菜植株上收集15个菌核病群体,采用7个多态性RAPD引物分析不同群体的遗传分化状况。结果显示,来自安徽省的大部分群体都聚在同一组内,而青海省的群体与欧洲群体的遗传基础相似,表明菌核病小种的分化主要以地理分布为主。不同的油菜栽培类型与菌核病群体的遗传相关性不大。AMOVA分析显示,菌核病群体总遗传变异的75.59%来自于群体内变异,而群体间的变异仅占24.41%(P<0.001),群体间遗传分化q)st=0.220,基因分化系数(Gst)为O.27

9、0,表明其群体间的遗传变异达27.o%,基因流(^枷)为1.35。按安徽省和青海省分为两个组群

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