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1、红光和钙离子对与大豆下胚轴生长相细胞壁酶的影响具体实验步骤:细胞壁酶的提取仪器药品：离心机0.2molLl磷酸缓冲液(PH7.0)冷丙酮3molL]LiCllOmmolL；1磷酸缓冲液(含200mmol^NaclPH7.0)操作步骤：将上面用于测定的20个下胚轴切段置于研钵中，加人0.2鵬1L/1磷酸缓冲液,研磨成浆，转入离心管，经lOOOOrpm离心10分钟，弃上淸液，沉淀物经洗涤经磷酸缓冲液洗涤2次，冷丙酮洗一次，再用磷酸缓冲液洗一次，得到细胞壁样品(上述操作在4°C下进行)。将细胞壁样品悬浮在2ml冷的3mol
2、I?LiCl中，在4°C冰箱中放罝十二小时，次闩取出，经lOOOOrpm离心10分钟，取上清液。用同样方法提取2次，合并上淸液，并使之在10mmolL_1磷酸缓冲液(200mmolL_1NaCl)屮在4"C卜透析18h(期间更换缓冲液)，再离心出去不溶物，及得细胞壁酶提取液过氧化物酶（POD）活性测定（愈创木酚法）仪器药品：721型分光光度计天平磁力搅拌机1%愈创木酚：30%过氧化氢20mmolI/'KH^O,100mmolL1磷酸缓冲液（PH6.0）反应混合液配置:取100mmoll?磷酸缓冲液（PH6.0）50m
3、l于烧杯中，加入愈创木酚28ul,于磁力搅拌机上加热搅拌，直至愈创木酚完全溶解，待溶液冷却后，加入30%过氧化氢19111，混合均匀，保存于冰箱屮。操作步骤：取光径lcm比色杯2只，于1只中加入已混匀的反应液3.5ml,KH2PO,溶液0.5ml,作为参比液；另外一只加入反应混合液3.5ml，酶液0.5ml，立即记时并置于分光光度计中。在470nm下测定光密度，每隔lmin读数一次，连续测20min,每次测定前重新对照校准。结果处理：以时间为横坐标，光密度为纵坐标。反应前期过氧化物酶活性随时间直线上升，达最大值后，其
4、相关曲线出现转折点，转折点出现的早晚取决于温度。在曲线的前期部分找到一段近似直线的部分，和直线起点的时间和光密度々，、直线终点的时间12和光密度A2。以每minA470变化0.01为1个过氧化物酶活力单位（u）o吲哚乙酸氧化酶活性的测定：（比色法测定）仪器药品：721型分光光度计恒温水浴锅20mmol/L磷酸缓冲液，pH6.0lmmol/L2,4一二氯酌:称取二氯酌16.3mg用蒸榴水配制成100ml。lmmol/L氯化键:称取MnCl2*4H2019.8mg用蒸馈水配制成100ml。lmmol/L吲哚乙酸：称取IA
5、A17.5mg,用少量乙醇溶解，然后将其倒于盛有约90ml蒸馏水的容量瓶中（100ml），稀释至刻度。口引哚乙酸试剂试剂:10ml0.5mol/LFeCl3,500ral35%过氯酸,使用前混合之即成，避光保存。用时于样品中加入试剂。实验步骤：1.按表格配置溶液，分别加入氯化锰lml，二氯酚lml,—起置于3（TC恒温水浴屮，保温30分钟吸取反应混合液2ml，加入吲哚乙酸试剂4ml,摇匀，置于30°C的黑暗处保温30分钟，使显色，分别测得吸光度，然后绘制标准曲线，计算直线回归方程。2.取试管2支，•丁•一试管中加入氯
6、化猛lml,二氯酪lml,iAA2ml,酶液lml,磷酸缓冲液5ml,混合均匀。另一试管屮除酶液用磷酸缓冲液代替外，其余成分相同。一起置于30°C恒温水浴屮，保温30分钟。3.吸取反应混合液2nd，加入吲哚乙酸试剂4ml,摇匀，置于30°C的黑暗处保温30分钟，使显色。4.将显色后呈现红色的反应液于分光光度计中测定吸光度，测定时用波长530nm。1.根据读数从标淮曲线上查出相应的吲哚乙酸残留量（或从直线方程式计算反应液中1AA的残留量）。2.从开始吋加入的吲哚乙酸量减去酶作用后残留的吲哚乙酸量，即得被酶所分解破坏的吲
7、哚乙酸量。以每ml酶液在1小时内分解破坏吲哚乙酸量（ug）表示酶活力的大小。编号012345吲哚乙酸/ml0.00.40.81.21.62.0磷酸缓冲液/ml8.07.67.26.86.46.0吸光度值仪器药品：721型分光光度计恒温水浴锅蒽酮试液的制备：0.2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到100ml,当口配制使用。。2.5mL0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲液(pH5.0)o.i%(wrv)昆布多糖实验步骤：1.取0.5ml细胞壁酶提取液，加入2.5mL0.1mol/
8、L柠檬酸-0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲液(pH5.0)和0.1%(W/V)昆布多糖，37°C保温1h2.用蔥酮法测定葡萄糖生成量，以每120小时形成1mg葡萄糖为1个酶活力单位，结果以单位/mg蛋白表示。蔥酮法测定葡萄糖1.对照品溶液的制备：精密称取经105°C干燥至恒重的无水葡萄糖对照品200mg,罝100ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀。精密
