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时间:2018-12-06
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1、间接ELISA法测定抗人口蛋白效价摘要:目的我们通过运用间接ELISA法,來测定羊抗人白蛋白的效价。方法在以往的实验屮,我们大多运用的是ELISA法來测定,这次,我们运用的是间接EL1SA法。结采在包被的人ALB浓度为OJ-dOlug/m1时,测出的抗人ALB的效价为1:10240。第论运用间接ELISA法,在检测抗人ALB的灵敏度高,优化『反应条件,可用于初步抗人ALB的检测。[关键词】间接ELISA法抗人白哥白效价间接ELISA法,是目前最常用的方法,因其灵敏度高,操作简便而被运用广泛「此方法是测定抗休最常用的方法,屈于非竞争结合试验c具原理是将抗原连接到固相
2、载休上,样品屮待测抗体与Z结合成固相抗原•受检抗休复合物,再用酚标一抗与固相免疫复合物屮的抗体结合,形成固相抗原•受检抗体•酶标二抗复合物,测定加底物后的显色程度,确定待测抗体含址。此次试验就是用间接ELISA测定未知的抗人ALB的效价。1•材料与方法1.1试剂0JMPH7.4PBS缓冲液、洗涤液:().()5%Twccri・PBS、1%酪蛊白洛液、硫酸溶液(学校实验主提供)、人ALB(SIGMA1A1653SIZE:250MGstoragciZ-SX:羊抗人ALB(效价1:70批号:2011()6贮存于4・2(TC,有效期:2年)、显色液(A液、B液Cat:ME
3、002可溶性TMB显色液)、酶标抗休(兔抗羊-HRP,武汉博I.徳生物匸程有限公司)1.2器材覷料试管、微几反W板、封片纸、试管架(学校实验主提供)、移裁黠(上海荣泰生化1•程有限公司:Thermo移液器)、洗板机(BI()・RADMODEL15751mmLnu)wash)、SM-3fl动化酶免分析仪(北京天石医疗用品制作所)、电热恒温培养箱(上海恒科学仪骼有限公司)1.3原理与方法包被抗原I温育洗涤3次加封闭液I温育洗涤3次加入标木I温育洗涤5次加入酶标记抗体I温育洗涤5次加入底物I温育加入终止液I检测13.1确定包被的抗原及兔抗羊IgG-HPR的「•作浓度,首
4、先从大范围对人ALB包被浓度及羊抗人IgG-HPR的浓度进行探索,即人ALB:().()lug/mk()」ug/mRLOug/mRl().()ug/mb羊抗人IgG-HRP:l:500.1:2000、1:8000:、1:32000,按下表进行操作,根据大范围检测间接ELISA法测定抗人口蛋白效价摘要:目的我们通过运用间接ELISA法,來测定羊抗人白蛋白的效价。方法在以往的实验屮,我们大多运用的是ELISA法來测定,这次,我们运用的是间接EL1SA法。结采在包被的人ALB浓度为OJ-dOlug/m1时,测出的抗人ALB的效价为1:10240。第论运用间接ELISA法
5、,在检测抗人ALB的灵敏度高,优化『反应条件,可用于初步抗人ALB的检测。[关键词】间接ELISA法抗人白哥白效价间接ELISA法,是目前最常用的方法,因其灵敏度高,操作简便而被运用广泛「此方法是测定抗休最常用的方法,屈于非竞争结合试验c具原理是将抗原连接到固相载休上,样品屮待测抗体与Z结合成固相抗原•受检抗休复合物,再用酚标一抗与固相免疫复合物屮的抗体结合,形成固相抗原•受检抗体•酶标二抗复合物,测定加底物后的显色程度,确定待测抗体含址。此次试验就是用间接ELISA测定未知的抗人ALB的效价。1•材料与方法1.1试剂0JMPH7.4PBS缓冲液、洗涤液:().(
6、)5%Twccri・PBS、1%酪蛊白洛液、硫酸溶液(学校实验主提供)、人ALB(SIGMA1A1653SIZE:250MGstoragciZ-SX:羊抗人ALB(效价1:70批号:2011()6贮存于4・2(TC,有效期:2年)、显色液(A液、B液Cat:ME002可溶性TMB显色液)、酶标抗休(兔抗羊-HRP,武汉博I.徳生物匸程有限公司)1.2器材覷料试管、微几反W板、封片纸、试管架(学校实验主提供)、移裁黠(上海荣泰生化1•程有限公司:Thermo移液器)、洗板机(BI()・RADMODEL15751mmLnu)wash)、SM-3fl动化酶免分析仪(北京
7、天石医疗用品制作所)、电热恒温培养箱(上海恒科学仪骼有限公司)1.3原理与方法包被抗原I温育洗涤3次加封闭液I温育洗涤3次加入标木I温育洗涤5次加入酶标记抗体I温育洗涤5次加入底物I温育加入终止液I检测13.1确定包被的抗原及兔抗羊IgG-HPR的「•作浓度,首先从大范围对人ALB包被浓度及羊抗人IgG-HPR的浓度进行探索,即人ALB:().()lug/mk()」ug/mRLOug/mRl().()ug/mb羊抗人IgG-HRP:l:500.1:2000、1:8000:、1:32000,按下表进行操作,根据大范围检测初步确定人ALB包被浓度及羊抗人IgG-HRP
8、的大致工作
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