hbv一dna定量检测与hbv血清标志物的相关性分析

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1、HBV—DNA定量检测与HBV血清标志物的相关性分析宋林林(山丙省汾阳医院检验科山丙汾阳032200)【摘要】目的探讨HBV-DNA荧光定量检测与HBV血清标志物定量检测结果并进行分析。方法同时检测638份血清标木用时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)对乙肝五项定量分析；用实时荧光定量PCR技术(FCU-PCR技术对HBV-DNA定量分析。结果(1)组224例,HBV-DNA阳性率98.2%(220/224};(2)组40例HBV-DNA阳性率100%(40/40);(3)组220例HBV-DNA阳性率47.3%(104/2

2、20);(4)组82例,HBV-DNA阳性率53.6%(44/82);(5)组22例,HBV-DNA阳性率36.3%(8/22);(6)组34例,HBV-DNA阳性率17.6(6/34);(7)组12例和(8)组4例未检出HBV-DNA。结论在各种HBV模式中，以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高。应用FQ-PCR定量检测HBV-DNA能准确地反映体内的HBV真实感染和复制情况，与TRFIA联合应用对乙肝的临床诊治和预后判定只有重要意义。【关键词】HBV血清标志物乙型肝炎病毒HBV-DNA荧光定量PCR【中图分类号】446【文

3、献标识码】A【文章编号】2095-1752(2012)29-0104-02乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一，每年死于该病的有100多万人。乙型肝炎病毒感染可导致肝脏的炎症，称为乙型病毒性肝炎(简称乙型肝炎)。是威胁我国人群健康最重要的传染病之一。HBV的传播途径主要有密切接触传播,母婴传播，血液传播和性传播。HBV携带者和乙型肝炎患者的血液、唾液、精液和阴道分泌物等都可以成为传播源。80%-90%的人在感染HBV后不出现临床症状，少数感染后出现急性肝炎的症状，部分HBV感染者可发展为慢性迁延性肝炎或原发肝癌。乙型肝炎TRFI

4、A检测项目主要包括两对抗原抗体(即HBsAg、HBsAb、HBeAg,HBeAg),和一个抗体(HBcAb)。故友称为乙肝两对半或乙肝五项。它反映病毒感染人体后机体免疫的状态，在判断HBV感染的程度，用药的效果及预后判断中有一定局限。HBV-DNA的检测是HBV感染最具敏感性和特异性的指标，能反映病毒在体内复制的真实情况，木研究采用FQ—PCR和TRFIA对乙肝五项和HBV-DNA之间的相关性进行探讨分析,二者结合对乙肝的诊断治疗和预后评估提供实验的科学依据。1材料与方法1.1研究对象638例实验标本来自2011年7月至201

5、1年12月我院门诊病人，其中男性432例，女性206例，年龄5-69岁，平均年龄35.8岁。1.2实验仪器上海新波生物技术冇限公司提供的EFFICUTA全自动样本前处理系统，及ANYTEST2000吋间分辨率荧光分析仪，荧光定量PCR仪为杭州博日FQD-66A定量PCR分析仪。13实验试剂FQ-PCR试剂为中山大学达安基因股份有限公司生产的HBV-DNA荧光定量PCR诊断试剂盒，HBV-DNA的测定单位为拷W/毫升，或Copies/mLTRFIA试剂为苏州新波生物技术奋限公司生产的乙肝五项诊断试剂盒。1.4实验方法采用常规的高

6、温裂解法对HBV—DNA进行定量测定，同吋做阴性、临界阳性、强阳性质控品及室内质控。标准参照品浓度为生产厂家的试剂盒统一提供。HBV阳性定量参考品浓度为：1.0×104IU/ml/管、1.0×105IU/ml/管、1.0×106旧/ml/管、1.0×107IU/ml/管。A:标本的提取:取100ul血清加入等量DNA浓缩液充分混匀，12,000rpm离心10分钟;去上清，沉淀加20UIDNA提取液充分混匀，瞬吋离心数秒；10CTC恒温孵育10±l分钟；12,OOOr

7、pm离心5分钟，分别加处理后的样品上清液及阳性定量参考品各2ul于反应管内，8000rpm离心1分钟进行PCR扩增反应。B:PCR扩增：93°C2分钟；93°C45秒→55°C60秒→10个循环;93°C30秒→55°C45秒→30个循环。FQ-PCR自动分析仪分析反应结果得出标本的乙肝病毒拷贝数。正常参考值为<1.00×103拷贝/ml。≥1×103IU/ml者为阳性，<1×103lU/mL者为阴性。乙肝五项用吋间分辨荧光免疫分析技

8、术(TRFIA)操作：所冇操作严格按说明书进行，每次操作均带标准品，每个标准品均做双孔测试。采用LOG--LOGTT软件模型建立标准曲线，以标准品浓度的对数值做横坐标，荧光计数值的对数值做纵坐标。经TRFIA检测仪测定并计算出待测抗原抗体的量。结果判断:≥临界值则为阳性