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1、焚光定量PCR检测HBVDNA室内质控的建立与应用评价刘兆军(山东省东营市人民医院检验科257091)【摘要】目的自制临床基因扩增实验室HBVDNA检测的室内质控品并对其应用进行评价。方法将试剂盒自带的弱阳性对照品、自制未灭活质控血清、自制灭活质控血清作为室内质控品的选择对象，每天与样木一起检测，连续30天，通过不精密度、LJ质控图，t检验，单因素方差分析来评价三者哪一个更适合基层医院PCR实验室作为室内质控品。结果弱阳性对照品检测结果H间不精密度为7.72%,未灭活自制质控血清检测结果日间不精密度为2.92%,灭活自制质控血清检测结果日间
2、不精密度为3.70%；灭活与未灭活自制质控血清配对t检验,t=-0.860,P=0.397,P>0.05,两组检测结果无显著性差异；对灭活前后两组数据进行单因素方差分析，F=0.901,P=0.346,P〉0.05,两组检测结果均值无显著性差异;SPSS17.0统计学软件绘制弱阳性对照品、未灭活自制血清质控品L-j质控图11月份30天的变化情况。结论自制质控血清无需灭活及其他特殊处理，完全能够满足PCR实验室室内质量控制的需要。【关键词】HBVDNA自制质控血清L-j质控图【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752
3、(2013)04-0032-02临床实验室的分析中质量控制是全过程质量控制的一个重要环节，临床实验室的误差有很大一部分是发生在样木的分析阶段［1］，因此加强室内质控的分析是实验室质量控制的一个重要环节。目前荧光定量PCR检测HBVDNA室内质控品的缺失是各基层检验科PCR实验室普遍存在的问题，因为市场上无商品化的质控品可以购买，大部分供应商只提供阴、阳性对照及标准品，因此通过实验室自制质控品是解决目前困境的主要途径。木研宄通过对商品化的弱阳性对照品、自制质控血清的不精密度(CV%)的分析；灭活自制质控血清与未灭活自制质控血清的比对以及室内质
4、控图的制作来探讨室内质控方法的建立及应用评价。一、材料与方法1.材料：收集乙肝六项全阴的健康体检者血清作为基质血清共9.9ml，收集拷贝数为106的乙肝病人血清0.1ml;取30个核酸定量检测试剂盒中的弱阳性对照品共30份。2.试剂与仪器：试剂为深圳凯杰生物工程奋限公司的核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法），采用杭州博日Line-Gene基因扩增荧光定量分析仪进行检测。3.方法：3.1自制质控血清的配制数量级为106的乙肝病人血清0.1ml与基质血清9.9ml按照1:100的比例混匀作为自制质控血清，各吸取llOul分装到0.5ml离心
5、管中，-20°C保存备用，作为待测质控血清与样本一起上机检测。3.2弱阳性对照品的使用方法从每个试剂盒吸取弱阳性对照品llOul分装到0.5ml离心管中，共30份，-20°C保存备用，作为待测质控血清与样本一起上机检测。3.3自制质控血清的火活方法自制质控血清取30份，56°C30分钟火活，主要0的是去除血清中微生物的污染对HBVDNA检测的影响，然后与未火活自制血清质控品一起-20aC冻存，备用。3.4实验方法每天取弱阳性对照品、火活自制质控血清、未火活自制质控血清各1份与病号样本一起检测，连续30天。将弱阳性对照品、未火活自制质控血清绘
6、制LJ质控图。比较试剂盒自带的弱阳性对照品和自制质控血清的不精密度（CV%）来判断两者作为质控品的优劣。利用配对t检验，单因素方差分析来比较自制质控血清火活前后检测结果有无差异。4.统计学分析检测结果取对数后进行分析，绘制LJ质控图；对数据进行描述性统计；自制质控血清火活前后检测结果进行配对t检验，评价检测结果右无显著性差异;用单因素方差分析来评价自制质控血清火活前后检测结果的均值有无显著性差异。利用SPSS17.0统计学软件对数据进行处理，并制作LJ质控图，P<0.05为差异有统计学意义。二、结果1.弱阳性对照品检测结果日间不精密度为7.
7、72%,未火活自制质控血清检测结果日间不精密度为2.92%,火活自制质控血清检测结果日间不精密度为3.70%；火活与未火活自制质控血清配对t检验,t=-0.860,P=0.397,P〉0.05,两组检测结果无显著性差异；对火活前后两组数据进行单因素方差分析，F=0.901,P=0.346,P〉0.05,两组检测结果均值无显著性差异，见表1、2、3。自制质控血清无论火活与否对检测结果影响不大，弱阳性对照品不精密度偏大，与自制血清质控品相比作为室内质控品不具优势，因此自制血清完全适合作为室内质量控制的质控品，且未火活自制血清制备方法简便，结果稳
8、定，无需火活，更适合基层医院PCR实验室。2.SPSS17.0统计学软件绘制的弱阳性对照品、未火活自制血清质控品的L-J质控图11月份30天的变化情况，见图1、2。从图上可以清楚
