牙周韧带细胞植入量与牙周组织再生量关系的动物实验

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1、牙周韧带细胞植入量与牙周组织再生量关系的动物实验【摘要】　　目的将不同数量牙周韧带细胞（PDLC）植入慢性实验性牙周缺损内，观察细胞植入数量与牙周组织再生量的关系，确定可促进牙周组织再生的有效细胞浓度和有效细胞数量。方法人工构建4只Beagle犬慢性实验性牙周缺损模型(5mm×5mm×3mm的牙槽骨U型缺损)，分别将载有1×104、1×105和1×106PDLC的胶原膜植入牙周缺损内。12周后行组织学观察，测量新生牙骨质(NC)长度百分率和新生牙槽骨(NB)面积百分率并行统计学分析。结果各组均可见不同程度牙周组织再生，1×104PDLC组和1×105PDLC组与对照

2、组比较差别无统计学意义，1×106PDLC组的NB面积百分率较对照组显著增高。结论在实验性牙周缺损内植入PDLC，可促进牙周组织再生，其有效浓度为5×107mL-1，有效数量为1×106PDLC。【关键词】细胞培养的牙周膜牙周组织引导组织再生牙周组织工程　　牙周治疗的最终目的是阻止病变进一步发展，并实现牙周组织再生。近年来牙周组织工程的迅速发展为牙周治疗开辟了一条新途径，其种子细胞的选择成为国内外学者关注的热点。牙周韧带细胞（periodontalligamentcells,PDLC）作为牙周组织中的优势细胞，是一组具有多向分化潜能的异质性多能干细胞，也是牙周炎治疗

3、后形成牙周新附着的主要细胞来源。研究证实,应用自体PDLC移植治疗慢性牙周缺损可显著促进牙周组织再生。但应用多少数量的PDLC才能达到促进再生的目的尚不明确。本实验以Beagle犬为对象，将不同数量的PDLC与载体材料复合后植入动物体内修复慢性实验性牙周缺损，通过组织学观察和测量，评价植入不同数量PDLC对牙周组织再生的影响。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1动物及分组Beagle犬4只（受试牙24颗），年龄1岁半，体质量10～15kg[四川省医学科学院实验动物研究所提供，许可证号：SCXK(川)200412]。24颗受试牙随机分为4组。A组：单纯引导性

4、牙周组织再生术（guidedtissueregeneration,GTR）组；B组：1×104PDLC/GTR组；C组：1×105PDLC/GTR组；D组：1×106PDLC/GTR组。　　1.1.2材料及设备DMEM培养液（美国Hyclone公司），胰蛋白酶（美国Gibco公司），特级新生牛血清(杭州四季青生物制品有限公司)，超净工作台(上海力申科学仪器有限公司)，CO2孵箱（德国Heraeus公司），倒置相差显微镜（XDS1A，广州光学仪器厂），MTT（美国Sigma公司），离心机（德国Heraeus公司），生物显微镜(CX31，日本Olympus公司)，BI

5、OGIDE再生膜（美国Osteohealth公司），酶标仪（德国Human公司），氯胺酮（江苏恒瑞医药股份有限公司），瞬康医用胶（北京瞬康医用胶有限公司），胶原膜（中国医学科学院生物医学工程研究所）。　　1.2方法　　1.2.1实验性牙周缺损的制备参照　　图2各组根分叉处愈合情况（HE染色×40）（略）　　Fig2PhotomicrographsoffurcationdefectofgroupA、B、C、D(HEstaining,×40)　　NC：NC；PDL：牙周膜.A：箭头示新生牙槽骨区域的多核巨细胞（×400）；B：切迹处新生的牙骨质，厚薄不均（×100

6、）；C：新生牙周膜（×200）；D：部分区域可见炎性细胞浸润，及长结合上皮（白色箭头所示）（×200）　　图3组织缺损修复区常见的病理改变（略）　　Fig3Thegeneralhistologicalchangesintherepairedarea　　表1各组NC长度和新生牙槽骨面积（略）　　Tab1Percentofneentumannem×5mm×3mm慢性实验性牙周缺损。结果显示，与对照组相比，1×106PDLC组能明显促进本实验性缺损区域牙槽骨的再生。闫福华等在不同浓度骨髓基质细胞修复犬牙周组织缺损的研究中发现，骨髓基质细胞浓度为106及107时更能促进牙周

7、组织再生[8]。上述研究及本实验结果可初步说明细胞植入量为106和/或以上时更易促进牙周组织再生。但尚未明确植入细胞数量与牙周组织再生之间是否存在正相关关系，以及过多细胞是否会产生抑制组织再生的作用。　　本研究中，各实验组和对照组均观察到不同程度的牙周组织再生，但各组内部仍存在较大差异，同一组中有些显示仅在缺损的边缘处有部分再生，有些则表现为新生的牙槽骨和新生的牙骨质覆盖整个缺损区。这些差异的形成可能与以下因素有关：首先，受实验条件限制，本研究使用的样本量较小；其次，犬的3个前磨牙根分叉的大小、形态和解剖学结构存在差异，也会直接影响组织再生；第三，GTR术后，由