水禽雷氏桿菌症3 價不活化菌苗之效力試驗

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1、水禽雷氏桿菌症３價不活化菌苗之效力試驗水禽雷氏桿菌症３價不活化菌苗之效力試驗喻昭芳＊、黃金城行政院農業委員會家畜衛生試驗所摘要　為瞭解自行研發的水禽雷氏桿菌症第1、2和6血清型3價不活化菌苗大量產製後應用於田間水禽場，其菌苗對鴨及鵝隻的保護力是否與之前實驗室內小批進行的結果一致。將量產1萬劑量菌苗分別實施於北京鴨場，番鴨場與白羅曼鵝場，適齡時帶回本所攻毒，以Beherens-Karber法計算LD50防禦指數評估菌苗效力。試驗成績均可達到其他不活化菌苗國家動物用藥品檢定標準，顯示免疫本菌苗後經人工感染可產生良好的保護效果。

2、有鑑於乾淨試驗動物難尋，另嘗試使用小白鼠測試，結果顯示小白鼠免疫3價菌苗後，血清凝集抗體及ELISA抗體價均可快速爬昇，免疫後攻毒成績亦說明人工感染可成立。關鍵詞：水禽雷氏桿菌，不活化菌苗，田間效力試驗，小白鼠模式69水禽雷氏桿菌症３價不活化菌苗之效力試驗緒言由Riemerellaanatipestifer（RA）引起的水禽雷氏桿菌症為台灣重要的水禽傳染性疾病，鴨和鵝在1~8週齡時對本病最具感受性，主要引起病禽敗血症、全身性漿膜炎、恢復禽隻生長遲緩及不合格屠體增加﹝9﹞，不良的飼養環境及其他疾病併發皆會造成本病的爆發，發病

3、率可由5%~75%﹝3﹞，發病場常一再發病，且清除不易而重複發生，造成業者經濟損失﹝9﹞，故發展有效菌苗防疫為一必然趨勢。本菌的血清型別複雜，目前共有21種血清型別﹝3、16﹞，Loh及張等人發現第5與第9型間；第12與6和16型間；第13與17型間；以及第17與第2和13型間具微弱交叉反應，其餘之間皆無交叉保護力﹝5、6、14﹞，而造成預防上的困難。最理想的方式是突破血清型別的限制，找出可產生保護力之致病或毒力因子來開發菌苗防疫﹝7﹞，目前雖有本菌相關毒力因子的報告﹝8、12、20﹞，但病原的致病機轉仍不明，國內亦缺乏快

4、速檢測試劑與商業化疫苗﹝2﹞，所以現階段施打有效的多血清型多價菌苗，應是最佳的防治方式與暫時解決的方法。96年本所已選定臺灣流行之第1、2和6血清型菌株研製與開發3價不活化菌苗﹝10﹞，並已製備小批菌苗於實驗室測試，結果顯示不論使用於北京鴨、番鴨亦或白羅曼鵝，其保護效果皆令人滿意。本次研究則進一步瞭解此3價菌苗大量產製後應用於田間水禽場，其菌苗對鴨及鵝隻的保護力是否與之前實驗室內小批進行的結果一致。本病在台灣水禽場與孵化場普遍污染，乾淨試驗動物取得困難，另嘗試同時免疫小白鼠與鴨隻獲得兩種動物的效力成績後進行評估，以瞭解是否

5、可使用小白鼠模式測定取代對象動物。69水禽雷氏桿菌症３價不活化菌苗之效力試驗材料與方法3價不活化菌苗製備將96年選定的台灣田間分離第1、2和6血清型RA菌苗株於37℃下培養於胰蛋白浸膏培養基（TrypticSoyBroth,BD）18~22小時大量產製，以0.3%福馬林溶液（FormaldehydeSol.37%,Merck）予以不活化，離心調整至適當濃度，再加上氫氧化鋁膠（AluminumHydroxideGel）調製成3價不活化菌苗﹝13﹞。效力試驗於第1及2週齡時在實驗室免疫北京鴨與白羅曼鵝各約45隻，另未注射各4

6、5隻供作對照，而在4週齡時使用同型（homologous）3種血清型菌株各分3階段濃度菌液（如：1010、109、108CFU/mL）每階段5隻動物分別肌肉注射攻毒免疫組及對照組，攻擊後觀察2週內兩組死亡結果，以Beherens-Karber法計算兩組LD50防禦指數（例：免疫組之LD50為1010.0，對照組為109.0，則兩組之LD50對數差為101.0）﹝1﹞，以此評估本菌苗的效力。之後應用於雲林縣和嘉義縣轄內水禽場，免疫注射各1,500隻北京鴨與番鴨，及2,000隻白羅曼鵝，屆4週齡時由免疫組與未注射組隨機取各45

7、隻帶回所裡攻毒，同上法計算其LD50防禦指數，最終獲得3價菌苗對田間水禽場鴨和鵝隻的效力試驗成績。小白鼠與鴨隻效力試驗一致性比較以3價菌苗同上法免疫鴨隻，同批菌苗稀釋2~5倍腹腔注射10~15g健康小白鼠，基礎免疫及補強注射間隔1週，鴨隻達4週齡時對鴨與小白鼠攻毒，同上法觀察2週，最終得到鴨和小白鼠的LD50防禦指數，並比較菌苗對兩種動物的保護性是否一致。小白鼠免疫後抗體消長檢測小白鼠免疫3價菌苗後，補免後每週採血5隻，至第8週結束，取得的血清進行平板凝集試驗及ELISA試驗，檢測3種血清型血清抗體力價消長，ELISA方法

8、詳見本所第43期研究報告，僅於二抗部份改為10萬倍稀釋HRP標示羊抗鼠抗體（Goat-Anti-MiceIgG,KPL），由血清OD值計算出S/N比（Sample/NegativeRatio）。結果效力試驗本次研究結果顯示，在實驗室方面菌苗的效力試驗成績，北京鴨於免疫3價菌苗後分別攻擊3種血清型菌株的L