新鲜骨髓吸出物直接种植支架材料构建组织工程韧带的可行性分析

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1、--华中科技大学硕士学位论文新鲜骨髓吸出物直接种植支架材料构建组织工程韧带的可行性研究硕士研究生汤明导师王洪教授摘要目的：种子细胞与支架材料复合培养是构建组织工程韧带的基本方法，但是种子细胞体外分离、培养、传代等步骤费时、费力，延长了组织工程韧带的构建周期，应用于临床无疑增加了患者的住院周期及治疗费用，我们查阅了国内外文献，少有提及关于应用新鲜骨髓吸出物直接种植于支架材料构建组织工程韧带的研究报告，但是有关于应用新鲜骨髓吸出物直接注射入关节内前交叉韧带（ACL）部分损伤局部来修复韧带损伤的报导，

2、因此我们假设新鲜骨髓吸出物直接种植于支架材料同样可以促进种子细胞的粘附、增殖、分化及分泌细胞外基质（ECM）等，并且效果不劣于以往分离培养BMSCs种植支架的效果，通过评价此两种细胞种植方法来探讨应用新鲜骨髓吸出物直接种植支架材料构建组织工程韧带的可行性，并试图找到一种新的更为简单易行且效果确切的细胞种植方法,同时评价丝素纤维/小肠粘膜下层（SIS）复合物作为韧带组织工程支架的可行性。方法：构建丝素纤维/小肠粘膜下层（SIS）复合支架材料；提取SD大鼠新鲜骨髓2ml，均分为A,B两份；A组：新鲜

3、骨髓吸出物1ml直接种植于前述支架材料上为骨髓种植组；B组：提取骨髓通过全骨髓法体外分离纯化、培养至第三代的BMSCs种植于相同支架材料为细胞种植组；另以未复合任何成分的支架作为对照组C组，检测三组材料细胞体外生物相容性，细胞粘附情况及增殖活性、Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌量，然后通过标准化重建家兔横断之前交叉韧带方式将A组材料植入动物体内，4周后取材，评价骨髓种植组材料体内生物相容性。结果：骨髓种植组孵育4h细胞粘附密度显著高于细胞种植组；骨髓种植组各时间点细胞增殖率均显著高于细胞种植组；骨髓种植组及细

4、胞种植组Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌量均显著高于对照组，但骨髓种植组及细胞种植组两组间Ⅰ型、Ⅲ型1-----华中科技大学硕士学位论文胶原分泌量未见显著性差异；骨髓种植组材料植入体内4周未引起致死性免疫排斥反应及严重炎症反应，未见明显韧带再生及血管化。结论：新鲜骨髓吸出物直接种植支架材料可见细胞在材料上的粘附、增殖及细胞外基质的分泌，且体内短期生物相容性可；同时前期材料生物力学测定证实该支架材料生物力学性能满足韧带组织工程支架材料力学要求。关键词：韧带组织工程细胞种植方法新鲜骨髓吸出物体内生物相容性2---

5、--华中科技大学硕士学位论文FeasibilitystudyofseedingfreshbonemarrowaspiratedirectlyonscaffoldstoconstructtissueengineeringligamentMedicalmasterTangMingTutorProf.WangHongAbstractObject:seedcellscombinedwithscaffoldmaterialsisthebasicmethodtoconstructtissueengineer

6、edligament,butseparatedfromtheseedcellsinvitro,cultured,passagedstepistime-consuming,laborious,andprolongcycleoftissueengineeringligamentusedinclinical,whichundoubtedlyincreasehospitalizationcycleandthecostoftreatment.werefertotheliterature,rarelymen

7、tionedontheapplicationoffreshbonemarrowaspiratedirectlybeingplantedonscaffoldstobuildtissueengineeringligament,buttherewereseveralreportsabouttheapplicationoffreshbonemarrowaspiratebeinginjecteddirectlyintotheintra-articularanteriorcruciateligament(A

8、CL)injurypartialtorepairligamentinjury,soweassumethatfreshbonemarrowaspirateseededdirectlyonthescaffoldscanalsopromotetheseedcelladhesion,proliferation,differentiationandsecretionofextracellularmatrix(ECM),andtheeffectofnon-inferiorityisolatedandcult