以phbv为支架构建组织工程化软骨

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1、以PHBV为支架构建组织工程化软骨作者：吴俊，孙俊英，李海燕，常江【关键词】组织工程;,,软骨细胞;,,支架；,,聚（羟基丁酸酯　　摘要：［目的］探讨聚（羟基丁酸酯羟基戊酸酯）（PHBV）多孔材料作为软骨组织工程支架的可行性以及体内外培养方式对软骨形成的影响。［方法］采用“压片-热处理-粒子析出”技术制备PHBV多孔支架。体外分离培养软骨细胞后接种到PHBV支架体外培养2周，期间扫描电镜观察细胞在支架上的生长情况，然后与单纯PHBV支架同植入裸鼠皮下继续培养4、8周后取材，与体外培养至6、10周的细胞-支架复合物同行组织学观察。［结果］电镜观察示软骨

2、细胞在支架上黏附、增殖良好并能分泌细胞外基质；组织学观察示PHBV浅层有新生软骨组织形成，且皮下培养的软骨组织比体外培养的更为成熟。单纯PHBV支架皮下培养没有软骨组织形成。［结论］PHBV可以作为软骨组织工程支架材料，体内培养较体外更有利于组织工程化软骨的形成。关键词：组织工程;软骨细胞;支架；聚（羟基丁酸酯羟基戊酸酯）Abstract：［Objective］Toinvestigatethepossibilityofusingpoly（hydroxybutyratecohydroxyvalerate）（PHBV）asscaffoldsforcart

3、ilagetissueengineeringandtoparetheengineeredcartilagegeneratedinvitroicemodles［Method］PHBVporousscaffoldsoulding,thermalprocessingandsaltparticulateleachingmethodsChondrocytesisolatedfromarticularcartilageplantedsubcutaneouslyinthedorsumofathymicnudemiceControlgroupsplantationo

4、fPHBValoneTheimplantsharvestedafterinvivoincubationof4and8inedhistologicallyChondrocytesculturedfor3,7and14daysonthescaffoldsinedbySEM［Result］SEMshoatrixonPHBVscaffoldsBothspecimensharvestedfromnudemiceandthoseculturedinvitrodemonstratedneation,oretypicalThosefromcontrolgroupss

5、hoation［Conclusion］PHBVcanbeusedasscaffoldsforcartilagetissueengineeringandnudemicemodleseemstofacilitatechondrogenesisparedKeya公司）；PHBV（宁波天安生物材料有限公司，分子量30万，40目过筛）；氯化钠（CR，中国医药集团上海化学试剂公司）；1d龄大耳白兔、1周龄裸鼠由苏州大学医学院动物实验室提供；压片机（FY10粉末压片机，天津市科器高新技术有限公司）；真空干燥箱（DZF6020型，上海益恒实验仪器有限公司）。12制备

6、PHBV多孔支架采用“压片-热处理-粒子析出”技术制备PHBV多孔支架。即按1∶7的比重分别秤取一定量的PHBV粉末和NaCl颗粒混合，在球磨机上球磨30min后模压成型，压力为10Mpa，保压1min。将柱状体置于180℃烘箱10min后室温冷却，经去离子水浸泡72h使NaCl溶解析出。将柱状体置于50℃真空干燥箱干燥48小时后备用。PHBV支架呈直径6mm、厚3mm的圆柱状，经测定孔径为200~300μm，孔隙率约80%。13软骨细胞的提取和培养取1d龄大耳白兔经70%酒精浸泡30min处死，无菌条件下取双侧髋、膝关节软骨，PBS漂洗后切碎成1m

7、m×1mm×1mm大小，加入3倍体积的02%Ⅱ型胶原酶置于37℃,恒温摇床消化4~5h，经150目铜网过滤离心，沉淀细胞用PBS漂洗后加入DMEM培养液（含10%胎牛血清，青霉素100U／ml，链霉素100μg／ml）制成细胞悬液，经台盼兰染色计数，示细胞活度＞90%；按（2~3）×104／cm2密度接种软骨细胞。置于培养箱（37℃、5%CO2）中培养，隔天换液。生长至90%融合时以025%胰蛋白酶-002%EDTA消化传代。14软骨细胞-PHBV支架复合物的体外培养PHBV支架经75%酒精浸泡消毒24h，PBS及DMEM培养液各漂洗3次，紫外线照射

8、下干燥至半湿状态。取第3代软骨细胞制成浓度为50×106／ml的细胞悬液，每个支架滴加悬液50μl后在培养箱