天花粉蛋白对荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究论文

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1、天花粉蛋白对荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究论文张艳琼，黄利鸣，吴江锋【摘要】目的通过建立荷U14小鼠宫颈癌模型，从个体水平初步探索天花粉蛋白（TCS）对荷瘤小鼠体内抗肿瘤活性。方法建立荷U14小鼠宫颈癌模型，TCS治疗，检测抑瘤率、脾指数、流式细胞术分析T细胞亚群。结果TCS治疗组，脾指数明显高于阴性对照组，C较阴性对照组、CTX组明显减少（P0.05）；与正常组比较无显著性差异。TCS组的C/C较阴性对照组、正常组明显增大（P0.05）；与CTX组比较无显著性差异。结论在体内.freelg/kg时，具有一定的免疫调节和增强体液免疫功能作用。【关键词】天花粉蛋白荷瘤鼠

2、抑瘤作用Abstract：ObjectiveTostudytheanti-tumoreffectoftrichosanthin(TCS)inU14mice.MethodsAftersettinguptheanimalmodelofU14,thesubsetoftheTcellsorinhibitoryrate,theindexofspleenandFCM.ResultsAftertreatmentalgroup.TheC/CinTCSgroupalgroups（P0.05）,buthadnosiguificantdifferenceasparedmunityand

3、increasethehumoralimmunityinvivog/kg.Keyor;Effectoftumor-inhibition人子宫颈癌是导致妇女死亡的一种常见恶性肿瘤。天花粉蛋白（trichosanthin，TCS)是从葫芦科植物栝楼trichosanthinkirilouiiMaxim的块根中提取的一种单链核糖体失活蛋白(ribosome-inactivatingprotein，RIP)。体外大量实验证实其具有抗宫颈癌的作用［1，2］，为进一步证实TCS是否具有体内抗宫颈癌和调节机体免疫的活性，我们进行了TCS对荷小鼠宫颈磷癌U14裸鼠体内实验研究。1

4、材料1.1材料TCS购自上海金山制药厂（1.2mg/ml）；环磷酰胺购自江苏恒瑞医药股份有限公司；RPMI-1640培养基购自Gibcol公司；PE标记C抗体购自eBioscience公司；FITC标记C抗体购自eBioscience公司；倒置显微镜和多功能显微镜及图像分析系统购自德国Leica公司；EPICSXL-4型流式细胞仪购自Beckmancoulter公司。U14肿瘤细胞株由三峡大学医学院免疫重点实验室提供。1.2动物6～8周龄近交系Balb/c小鼠32只，体质量18～20g，雌性，购自武汉大学实验动物中心。2方法2.1TCS对实体瘤的抑制作用复苏U14

5、细胞株，昆明小鼠腹腔中反复传代，第3代后5～7d，取小鼠腹水，用无菌生理盐水调整细胞浓度为2×107/ml。常规消毒后，取0.2ml细胞悬液接种于Balb/c小鼠右侧腋窝皮下。接种后的小鼠随机分3组：TCS实验组、阴性和阳性对照组，每组8只。TCS实验组：用生理盐水稀释TCS注射液，药物浓度为0.2mg/kg，0.2ml/只，给药1次/d，连续给药10次。阳性对照组：环磷酰胺（cytoxan,CTX），30mg/kg。阴性对照组给予等体积的生理盐水。另设正常组8只，不进行任何处理。2.2组织取材和称重第11天称小鼠体质量。眼球取血，置于加有抗凝剂的试管内。处死小鼠

6、，取出肿瘤组织、脾脏，称瘤重、脾重，计算抑瘤率(inhibitionrate,IR)。计算脾指数，公式为：脾指数(SI)=脾脏重量(S)/体质量(小鼠皮下形成的一个异位子宫颈癌,能在小鼠皮下形成实体瘤(成瘤率达100%)，因此建立U14动物模型是研究宫颈癌的理想模型［5］。我们的研究表明TCS的抑瘤率是11.2%，采用重组免疫毒素EGF-TCS进行靶向治疗是否可以进一步提高抑瘤率值得进一步探讨。TCS通过不同途径影响机体的细胞免疫和体液免疫。TCS可使正常人外周血C和CD+20T细胞百分比升高,CT细胞百分比下降,从而使C/C比值增大［6］。TCS能诱导Th2细胞

7、中IL-4和IL-10的表达，但抑制Th1细胞中IL-2和IFN-gamma的表达［7］。我们初步探索了剂量为0.2mg/kg的TCS在机体免疫应答中的作用，TCS可以引起小鼠外周血中C细胞显著增加,.freelediatedBcl-2expressionintrichosanthin-inducedHelacellapoptosis［J］.BiochemBiophysResmun,2007,363(1):101.［2］王艳华，黄利鸣.OPCML、DAPK基因甲基化与宫颈癌CasKi细胞凋亡相关性的研究［J］.中国药理学通报，2008，24(4):543.［3］孙

8、健，吴志全