超声辅助提取忽地笑中加兰他敏的工艺研究

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1、超声辅助提取忽地笑中加兰他敏的工艺研究张明霞，单宇，冯煦，彭峰，江玉梅，王鸣，夏冰【摘要】　　目的采用正交实验设计探讨超声辅助提取忽地笑中加兰他敏的最佳工艺。方法忽地笑鳞茎样品碱化后用醋酸乙酯超声辅助提取，用HPLC法测定加兰他敏含量。结果最优提取条件为：加入0.7ml10％NaOH溶液碱化样品，在65℃，210ethodsGalanthamineinedbyHPLC.ResultsTheoptimalultrasound-associatedextractionconditionsl10％NaOH,extractiontemperature65℃,ultrasonicpoes

2、,10minuteseachtime.ConclusionTheultrasound-associatedextractionmethodofgalanthamineinLycorisaureaissimpleandefficient.　　Keyine;Orthogonalarraydesign;Ultrasound-associatedextraction;HPLC　　加兰他敏(Galanthamine，简称GAL)是一个叔胺生物碱，最早是在1952年由Proskurnina和Yakovleva从石蒜科植物沃氏雪花莲Galanthuser'sDisease，AD)，并因其无心

3、、肝毒副作用而有望成为治疗该病的首选药物〔4，5〕。在我国加兰他敏的来源植物中，忽地笑LycorisaureaHerb.鳞茎为石蒜属中提取加兰他敏的良好原料〔6〕。此外，忽地笑分布广泛，蕴藏量大，在长江中下游一带的低山丘陵区常成大片分布〔7，8〕。　　鉴于加兰他敏在医学上的重要应用，因此对其进行开发利用研究具有十分重要的现实意义。本文利用溶剂浸提，并借助超声波辅助提取（Ultrasound-associatedextraction，UAE）这种新的工艺方法，详细研究了忽地笑鳞茎中加兰他敏的最佳提取工艺条件，并采用HPLC方法测定其中加兰他敏的含量，为以后加兰他敏提取分离新工艺研

4、究提供理论基础。　　1材料与方法　　1.1材料、试剂与仪器　　忽地笑为200606采于南京中山植物园药物园内，原产地为安徽，引种至南京中山植物园两年，由江苏省中国科学院植物研究所药用植物研究中心袁昌齐研究员鉴定。除去根须，将鳞茎切成薄片，60℃烘干24h，冷至室温后粉碎过80目筛待用。KQ-300DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；美国Agilient1100高效液相色谱仪；RE-52c旋转蒸发仪（巩义市英峪予华仪器厂）；德国SartoriusBP221S电子天平。乙腈及其他高效液相色谱仪所用试剂均为色谱纯；加兰他敏对照品为江苏省中国科学院植物研究所药用植物研究

5、中心自制，HPLC检测纯度大于98％。其他试剂为分析纯。　　1.2方法　　1.2.1UAE提取忽地笑中加兰他敏准确称量待测样品0.5g，按要求加入一定量10％NaOH溶液碱化样品15min后，加入7ml醋酸乙酯，在一定温度下超声波提取一定时间，过滤，滤液真空干燥后甲醇定容至5ml,过滤后进行HPLC测定。3次重复。本实验料液比为1∶14。　　1.2.2HPLC测定条件Gemini-C18色谱柱（5μm,4.6mm×250mm，美国phenomenex公司）；流动相为乙腈-水相（20∶80，每800ml水相中含有2.67ml二丁胺，用磷酸调节pH为9.0±0.05；流速1.0ml

6、·min-1；检测波长289nm；柱温为室温；进样量10μl。　　1.2.3超声波提取中主要影响因素的确定实验表明，提取所用的溶剂种类、溶剂用量、浸泡时间，超声波提取功率、提取温度及提取时间等因素都对提取率有影响。实验初期尝试用甲醇和乙醇作为提取剂，但都不如醋酸乙酯提取率高。提取次数的选择：称取0.5g忽地笑干燥鳞茎粉末,加入0.5ml10％NaOH溶液碱化样品15min后，加入7ml醋酸乙酯,在65℃，120in,然后将提取过的鳞茎分别在相同条件下进行第2～4次提取,结果各次加兰他敏的提取含量分别为0.03683%，0.00950%，0.00172%，0.00035%。表明经

7、过3次提取加兰他敏基本提取完全。　　1.2.4正交实验设计根据已有的资料和实际情况,选用超声功率、超声提取总时间、碱量和超声提取温度作为考查因素，以忽地笑中加兰他敏的提取效率为考查指标，选用L9(34)正交表，因素水平见表1。表1因素水平（略）　　2结果用HPLC测得加兰他敏含量的结果见表2。运用SPSS13.0对表2进行统计处理，其方差分析结果见表3。表2L9(34)正交实验设计表及结果（略）表3方差分析（略）由表2可知，影响超声辅助提取忽地笑中加兰他敏的4个因素由大到小的顺序为：D，C，