分子生物学常用核酸分子探针简介

《分子生物学常用核酸分子探针简介》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、分子探针简介分析化学新方法新技术写在前面经典化学分析：沉淀剂、滴定剂、萃取剂、指示剂和显色剂等发展方向：微型化、仿生化、自动化、信息化目前最高水平：DNA序列分析中标记碱基的四种分子荧光探针微型化：纳米芯片、生物芯片及芯片上的实验室仿生化：电子鼻和电子舌的传感器自动化：原位及体内实时在线检测信息化:临床、环境及生产过程检测的网络化生物分子探针主要类型：离子探针蛋白质及酶的荧光探针核酸分子荧光探针离子探针？什么东东啊？将生物大分子中的非过渡族金属离子用具有光、磁信息的过渡族金属离子置换，用这些金属离子与生物大分子的相互作用行为探查非过渡金属的生物功能，即为离子探针技术。这样就能对溶剂

2、状态中生物分子构象和行为进行研究，弥补了X射线衍射方法只能对晶体进行测定的不足。所用的过渡族金属离子就叫离子探针离子探针的生物及化学依据大多数的酶要靠金属离子表现其活性探针离子具有与原生物分子中的金属离子相同或相似的物理化学行为：如半径、化学配位性质、立体化学行为等，可以置换原来这么简单啊！蛋白质三级结构血红素肽链扭转血红蛋白的三级结构非过渡金属离子（饱和电子层结构）过渡族金属离子（不饱和电子层结构）K+1Zn+2Mg+2Ca+2Co+2Tl+1Mn+2Gd+3Eu+3Tb+3离子半径/nm0.1330.0690.0550.0990.0720.1400.0880.09380.095

3、0.0923静电势/（Z2/r）0.754.805.123.784.880.674.40表一：一些生物大分子中有关金属离子参数Mn+2取代苹果酸酶中的Mg+2后，该酶同样具有催化L-苹果酸脱羧地反应活性碳酸酐酶、羧酞酶及乳酸脱氢酶中含有Zn+2，用Co+3代替Zn+2，这些酶仍具有活性伴刀豆球蛋白A含有Mn和Ca，用稀土离子Eu+3,Tb+3,Gd+3置换Ca+2后，该蛋白仍然保持有结合糖的活性蛋白质及酶的荧光探针蛋白质是生物大分子，它能在溶液中与某些染料静电吸引或氢键结合，可用紫外可见光度法或荧光测定蛋白质。另外蛋白质含有氨基（—NH2或—NH—），—SH，—COOH和=CO,可

4、用与以上基团发生反应的荧光衍生试剂对蛋白质标记，进而用色谱及电泳分离紫外可见或荧光检测蛋白质蛋白质的荧光，主要是构成它的色氨酸，络氨酸和苯丙氨酸具有的荧光，通过蛋白质的天然荧光用荧光法检测比紫外吸收法灵敏。荧光探针是一类比蛋白质荧光发射较强荧光的染料，它吸附或共价结合到蛋白质上，荧光特性会发生变化，从而可以研究蛋白质的结构和测定蛋白质。这其中有一种叫做免疫荧光技术免疫荧光技术，即荧光抗体方法，就是把特异性抗原多次注入动物体，使之产生抗体，将抗体球蛋白从血清中分离出来，用荧光染料标记，制成荧光标记抗体溶液。免疫荧光染色比其他的生物染色方法有较高的特异性和灵敏度。抗体（免疫球蛋白）与荧

5、光染料结合后，仍不失抗体的免疫活性，称为荧光抗体。用于标记抗体的荧光染料于一般的荧光染料不同，必须容易与抗体球蛋白结合，又不影响其免疫活性；还要求性能稳定、容易溶解和标记方法简单。由于蛋白质本身也具有荧光，为了减少蛋白质本身的荧光干扰，标记抗体的荧光染料不但荧光量子产率高，还要求荧光发射波长较长。常用的标记抗体的荧光染料有荧光素异硫氰酸酯、四甲基罗丹明异硫氰酸酯和罗丹明B200等。核酸分子荧光探针及核酸染色沿核酸的螺旋方向看，双螺旋表面有两个沟槽，一个宽槽和一个窄槽，这两个沟槽使碱基外露，为分子探针或其他分子与碱基作用提供了空间。窄槽宽槽核酸染色剂及荧光探针的应用溶液中核酸的定量测

6、定单分子核酸检测核酸的凝胶染色体电泳分离检测在荧光共振能量转移（FRET）技术中的应用DNA序列分析DNA序列分析中的荧光染料：在电泳分离荧光法检测DNA序列分析中，通常分四组（A,C,G,T体系）进行，如果用四种不同的荧光染料为探针,标记一个共同的引物，分别用在A、C、G、T四个反应体系中，等于用不同的探针专一地标记了不同的碱基，利用各荧光探针光谱的差别便可把不同的碱基区分开,因此选择一组四种合适的染料成为关键，它们应满足以下条件：(1)吸收和发射光谱应在可见光区，以降低散射和荧光背景；(2)各染料的荧光发射波长因该有明显不同，以便区分不同染料;(3)应有很强的荧光强度，以获得高

7、灵敏度；(4)不严重干扰引物的杂交作用，使其不影响测序反应效率；(5)染料的存在不严重改变电泳谱图。表二：菲啶和口丫啶类嵌入剂及其与DNA结合物的有关性能表三：含吲哚和苯并咪唑类嵌入剂及其与DNA结合物的有关性能核酸分子探针种类：目前作为核酸分子探针的有机分子染料有几十种，按探针分子结构可分为：菲啶和口丫啶类染料、吲哚和咪唑类染料、碳菁阳离子染料、苯并呋喃酮（香豆素）类等。表四：TOTO-1系列染料及其与DNA结合物的有关性能探针序号溶解性λmax/nmε*103/（