人群维生素D筛查方法

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1、ICS11.020C55WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T×××××—××××人群维生素D筛查方法ScreeningMethodofVitaminDinPopulation点击此处添加与国际标准一致性程度的标识-××-××发布××××-××-××实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发布WS/T×××××—××××前  言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与健康所、宁波市疾病预防控制中心、深圳市计量质量检测研究院、深圳市慢性病防治中心、中粮营养健康研究院、南京医科大学（待定）。本标准主要起草人：（待定）。

2、8WS/T×××××—××××人群维生素D筛查方法1　范围本标准规定了人群维生素D营养状况筛查的方法。本标准适用于血清/血浆中25-羟基维生素D的测定。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。WS/T225临床化学检验血液标本的收集与处理。3　术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1　25-羟基维生素D25-HydroxyvitaminD；25(OH)D25-羟基维生素D是血中维生素D的主要存在形式，占体内维生素D95%以上，

3、25(OH)D半衰期较长，因此，血清25(OH)D水平能较好地反映体内维生素D的营养状况。主要包括两种形式：25(OH)D2、25(OH)D3。25-羟基维生素D225-HydroxyvitaminD2：由麦角钙化醇经一级羟化后生成，又称25-羟基维生素D2。25-羟基维生素D325-HydroxyvitaminD3：由胆钙化醇经一级羟化后生成，又称25-羟基维生素D3，主要来源于阳光照射，在体内合成25-羟基维生素D3，是血液中维生素D的主要存在形式。4　样品的采集及保存4.1　取血4.1.1　血液标本的采集:静脉血。取血方法见WS/T225。4.1.2本法使

4、用血清（血浆），血清（血浆）可分装。4.1.3每管血清/血浆量≥200μL。4.2　血清（血浆）保存8WS/T×××××—××××标本于2℃～8℃可稳定7天，-20℃可稳定12个月。若标本不能及时检测，建议于-70℃存放标本，仅一次冻融。1　测定方法1.1　酶联免疫法1.1.1　原理样本中25羟基维生素D与羊25(OH)D抗体形成复合生物素，通过洗液除去非结合物，再加入酶标记的抗原或抗体，此时，能固定下来的酶量与样品中被检物质的量相关。通过加入与酶反应的底物显色后，根据颜色的深浅可以分析样品中25羟基总维生素D的含量。5.1.2仪器和材料5.1.2.1恒温培养箱

5、、酶标仪、洗板机；5.1.2.225-羟基总维生素D检测试剂盒（酶联免疫法）5.1.3分析步骤5.1.3.1按血清（血浆）25羟基总维生素D酶联免疫试剂盒使用说明准备仪器、标准品、质控品、试剂等。5.1.3.2血清（血浆）标本应达到室温，混合均匀后进行测定，确保样品杯中无气泡。为了防止液体挥发影响结果，所有样品、标准品、质控品上机后都应在2小时内测定。5.1.3.2严格按仪器和试剂盒操作说明要求进行标准品、质控品及样品的测定，并读取、保存和计算检验结果。1.2　化学发光免疫法5.2.1原理将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于25-羟基

6、总维生素D的检测分析技术，包括直接化学发光免疫法、间接化学发光免疫法和电化学发光免疫法。直接化学发光免疫法是以化学物质，如异鲁米诺、吖啶酯等直接标记抗原或抗体，免疫反应后，直接引发化学发光反应进行定量检测。间接化学发光免疫法是用某些工具酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）标记抗原，在免疫反应的终点用鲁米诺等发光体系测定发光强度，从而确定标记结合抗原的量。电化学发光免疫法是指在电极上施加一定的波形电压或电流信号，进行电解反应的产物之间或与体系中共存组分反应产生化学发光的现象。8WS/T×××××—××××5.2.2仪器和材料5.2.2.1化学发光免疫分析仪5.2.

7、2.225-羟基总维生素D检测试剂盒（化学发光免疫法）5.2.2.3光路检测剂5.2.3分析步骤5.2.4.1按化学发光免疫分析仪器操作说明和试剂盒使用说明，准备仪器、试剂、标准品和质控品等。5.2.4.2进行化学发光免疫分析仪系统测试以及25-羟基总维生素D检测试剂盒定标。5.2.4.3血清（血浆）标本应达到室温，混合均匀后进行测定，确保样品杯中无气泡。为了防止液体挥发影响结果，所有样品、标准品、质控品上机后都应在2小时内测定。5.2.4.4严格按仪器操作说明要求进行标准品、质控品及样品的测定，并读取和保存检验结果。1.1　LC-MS/MS法1.1.1　原理血

8、清（血浆）中的25-羟基