骨髓间充质干细胞治疗缺血性脑血管病研究进展

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1、骨髓间充质干细胞治疗缺血性脑血管病研究进展【摘要】骨髓间充质干细胞是存在于骨髓中的一种具有跨胚层分化潜能的干细胞。近年来研究发现其可在中枢神经系统内存活并能分化为神经样细胞，在体外也可通过诱导向神经细胞转化，并对脑缺血、脑外伤等疾病的神经功能的缺损有改善作用。其取材方便、体外扩增迅速且能以多种途径移植包括静脉移植、脑内移植。故骨髓间充质干细胞在中枢神经系统损伤修复中的临床应用前景广阔。【关键词】骨髓间充质干细胞；脑缺血；移植【Abstract】Mesenchymalstemcells(MSCs)arestemcellsthatlyinginmarroedasneuralstemcel

2、ls(NSCs)invivoandexvivoasso.Itcouldbeusedtoreplacetheneuralcellsorrepairthenervoussystem，suchasischemicstroke，braininjuryandsoon.MSCsethodofsuchasvEintransplantation，directedtransplantation.Itprovidesahopefulmethodforcentralnervoussystemdiseases.【Keyesenchymalstemcells;ischemicattack;transplant

3、ation脑血管疾病（cerebrovasculardisease，CVD）是由于各种脑血管病变所引起的脑部病变。其中以缺血性脑血管病为主，其发病率、致残率、死亡率随年龄增长而增长，因病因、发病机制复杂，所采取的干预措施如早期溶栓等仍存在着局限性，使缺血性脑血管病的治疗状况得到根本改善的相关研究仍待进一步深入。自1992年Reynolds和SCs）是继胚胎干细胞后备受关注的来源于骨髓的细胞群，由于这些细胞易于在塑料瓶皿表面贴壁生长形成纤维细胞样集群，曾被称为贴附塑料细胞，后又因其存于骨髓基质而称为骨髓间充质干细胞。MSCs具有多向分化潜能，特性稳定，能向脂肪母细胞、成骨细胞、脂肪细胞

4、、神经细胞等［1~3］分化。目前，研究表明MSCs免疫原性较弱，能直接或间接抑制T细胞的功能，使MSCs可应用于同种异体或异体移植，拓宽了临床治疗的前景。1骨髓间充质干细胞的特点1.1定义骨髓间充质干细胞(MSCs)是中胚层来源的具有多向分化能力的干细胞，主要存在于全身结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富，胎儿脐血中也可分离得到。具有向骨细胞、软骨细胞、肌腱细胞、肌细胞、神经细胞、干细胞、脂肪细胞和造血细胞等分化的能力。同所有的干细胞一样，骨髓间充质干细胞也具有自我更新能力和多向分化潜能。它虽然仅占骨髓单核细胞的0.001％~0.01％，但是却具有惊人的增殖能力。1.2骨髓

5、间充质干细胞的体外培养及鉴定1．2．1骨髓间充质干细胞的体外培养1970年，Friedenstein等［4］，将含全骨髓组织用塑料培养基培养，4h后弃去未贴壁细胞，经过3~4天的休眠后迅速增殖，培养数代后形态趋于一致，呈纺锤状。并发现在塑料培养基上，骨髓基质细胞可逐渐分化为骨、软骨。提示在体内可能具有同样的分化功能。Kohyama等［5］首次报道使用5-氮杂胞苷（5-AZa-c）和Noggin作为诱导剂，使MSCs可分化为功能成熟的神经细胞。Sanchez-Ramos等［6］将骨髓基质细胞培养在含有EGF和脑源性神经营养因子（BDNF）的培养液中，检测到巢蛋白（nestin）及其RN

6、A的表达，也表达星形胶质细胞标记的胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经元特异性核蛋白（neuron-specificnuclearprotein，NeuN）；与胚胎中脑或纹状体细胞混合培养时，一部分骨髓基质细胞分化为神经元和神经胶质，分别表达NeuN、GFAP。E）和二甲基亚枫(DMSO)加入骨髓间充质干细胞中，80%的细胞表达神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经微丝-M（neurofilament-M，NFM）、NeuN，出现神经细胞表型，诱导分化5h后细胞即出现巢蛋白，6天后消失；神经生长因子（NGF）受体trkA(一种生长因子受体)的表达，提示MSCs诱导后逐渐向成熟的神经细胞转

7、化。以上结果表明，MSCs在体内外均有自我分化﹑扩增功能，在特定条件下向多种组织细胞分化。其自身MSCs避免了伦理﹑免疫排斥等问题，为神经干细胞应用提供了无限制的来源。1.2.2骨髓间充质干细胞鉴定MSCs形态呈纤维样，可形成均匀的集落。分析表明，分离的细胞群体表型单一，细胞表面蛋白如CD29、CD44、CD17、CD106、CD120A、SH2、SH3等呈阳性。而CD14、CD34和CD45造血谱系标记则呈阴性。用于鉴定神经干细胞特异性分子标志物有：ne