临床免疫学检验SOP

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1、月亮县中医院项目文件编号：YCXZYYJYK_SOP_13页码：第-56-页，共56页检验科免疫SOP手册版本：第3版，第1次修订生效日期：20180101免疫SOP手册目录编号名称页面SOP_13-1酶联免疫吸附试验（ELISA）基本原理3-7SOP_13-2雷杜RT—6100酶标分析仪标准操作程序8-10SOP_13-3雷杜RT-3000洗板机标准操作程序11-12SOP_13-4酶免项目标准操作程序13-25SOP_13-5金标免疫项目标准操作程序26-38SOP_13-6手工免疫检验项目标准操作程序39-42SOP_13-7传染病免疫检验室内质控的标准操作规程43-45SOP_13-

2、8传染病免疫检验室间质评（EQA）标准操作规程46-47SOP_13-9梅里埃vidas免疫荧光分析仪标准操作程序48-54SOP_13-10锦瑞PA200特定蛋白仪标准操作程序55-56文件审批者：　　　　　　　　　　发布日期：编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时间：20180101时间：20180101时间：20180101月亮县中医院项目文件编号：YCXZYYJYK_SOP_13页码：第-56-页，共56页检验科免疫SOP手册版本：第3版，第1次修订生效日期：20180101操作者从事本项工作前，必须认真学习并掌握本手册的内容，严格按照操作规程操作！学习者:休订书册与增补程序内

3、容与日期：学习者：休订书册与增补程序内容与日期：学习者：编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时间：20180101时间：20180101时间：20180101月亮县中医院项目文件编号：YCXZYYJYK_SOP_13页码：第-56-页，共56页检验科免疫SOP手册版本：第3版，第1次修订生效日期：20180101SOP_13-1酶联免疫吸附试验（ELISA）基本原理与注意事项一、基本原理1、包被1.1、固相载体的要求（1）、结合抗体或抗原的容量大（2）、抗体或抗原牢固地固定在其表面（3）、不影响免疫反应性（4）、利于反应充分进行（5）、固相方法简便易行，快速经济1.2、固相载体的材料：

4、聚笨乙烯1.3、包被coating将抗原或抗体结合于固相载体。1.4、封闭blocking用1%～5%的牛血清白蛋白或5%～20%小牛血清消除固相载体表面未结合的位点，消除非特异性吸附。2、反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体。标记酶的要求：(1)、活性高(2)、性质稳定(3)、专一性强(4)、酶催化底物的显色信号易于判断和测量(5)、方法敏感，重复性好，简单易行(6)、酶的底物易于配制保存，酶及底物价廉常用酶辣根过氧化物酶HRP（ELISA中应用最为广泛的标记用酶）编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时间：20180101时间：20180101时间：20180101月亮县中医院项目

5、文件编号：YCXZYYJYK_SOP_13页码：第-56-页，共56页检验科免疫SOP手册版本：第3版，第1次修订生效日期：201801013、洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离。4、底物显色HRPDH2+H2O2—————→D+2H2OH2O2为受氢体，HRP对受氢体的专一性很高。供氢体DH2习惯上被称为底物，底物有多种。常用底物：四甲基联苯胺TMB四甲基联苯胺TMB是ELISA中应用最广泛的底物。TMB反应后显蓝色，加酸终止反应后变为黄色,测定波长450nm，稳定，无致癌性。二、常用方法与原理1、双抗体夹心法方法：用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色应用：

6、二价或二价以上的较大分子抗原测定乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等2、双抗原夹心法原理：类似双抗体夹心法操作步骤：类似双抗体夹心法应用：乙型肝炎表面抗体编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时间：20180101时间：20180101时间：20180101月亮县中医院项目文件编号：YCXZYYJYK_SOP_13页码：第-56-页，共56页检验科免疫SOP手册版本：第3版，第1次修订生效日期：201801013、竞争法（测抗原）方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。应用：用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药物、激素等）4、竞

7、争法（测抗体）原理：类似检测抗原的竞争法应用：乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的检测编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时间：20180101时间：20180101时间：20180101月亮县中医院项目文件编号：YCXZYYJYK_SOP_13页码：第-56-页，共56页检验科免疫SOP手册版本：第3版，第1次修订生效日期：201801015、间接法方法：用已知抗原包