益母草中益母草碱的hplc检测

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1、益母草中益母草碱的HPLC检测作者：巩长芹，周礼玲，王永平，常筠,张师愚【摘要】目的建立益母草中益母草碱的HPLC检测方法。方法C18色谱柱，流动相：甲醇pH=1.7的醋酸/醋酸钠缓冲液（体积比85∶15），流速0.6mL·min-1，检测波长277nm，灵敏度0.1AUFS，柱温25℃。结果益母草药材中益母草碱的质量分数为0.015％;平均回收率为100.08%，RSD为0.15%。结论高效液相色谱直接检测益母草碱，简便易行，结果准确可靠。【关键词】益母草；益母草碱；高效液相色谱法　　益母草为唇形科植物益母草(LeonurusheterophyllusS

2、enexC18柱(4.6mm×250mm，5μm),Anastar色谱工作站；紫外分光光度计，SHIMADZU公司，UV2401PC。甲醇为一级色谱纯；益母草碱对照品（购于安徽省新星药物开发有限责任公司，纯度为99％）；益母草（购于天津市南开区协和药店，经我校中药学院中药鉴定教研室张丽娟副教授鉴定）。　　2方法与结果　　2.1紫外光谱最大吸收测定　　在200~400nm之间进行全波长扫描，扫描图如图1所示，益母草碱在215nm和277nm处均有吸收峰，最大吸收277nm，故选用277nm作为高效液相测定的波长。　　2.2色谱条件色谱柱：PhenomenexC

3、18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：甲醇pH=1.7的醋酸/醋酸钠缓冲溶液（体积比85∶15），流速：0.6mL·min-1，检测波长：277nm，灵敏度：0.1AUFS，柱温：25℃，进样量：20μL。　　2.3对照品溶液的制备精密称取盐酸益母草碱0.6mg，溶于25mL流动相中，摇匀，制得0.024mg·mL-1对照品溶液。分别取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、5mL溶于5mL流动相中，分别摇匀，得质量浓度分别为00024、0.0048、0.0072、0.0096、0.024mg·mL-1的对照品溶液。各用微孔滤膜滤过后，按“

4、2.2.1”项下的色谱条件进样测定（HPLC分析如图2所示），测得各溶液峰面积，计算得回归方程：C=2.222×10-8A－6.213×10-4,r=0.9998。益母草碱在00024~0.024mg·mL－1间呈现良好的线性关系。　　图1全波长扫描图（略）　　Fig.1otheratogramofreferencesubstance　　2.4样品溶液的制备精密称取益母草提取物粗品2.2mg，溶于10mL流动相中，摇匀即得。　　2.5样品溶液的测定取样品溶液用微孔滤膜滤过后，按“2.2.1”项下的色谱条件进样测定，测得溶液的峰面积为1099398，计算质量

5、分数为10.82％，在原药材中的质量分数为0.015％。　　2.6精密度试验取同一样品溶液，按“2.2.1”项色谱条件下重复进样6次，测得峰面积分别为1106469、1110843、1099260、1106190、1103044、1112296，平均峰面积为1106350.3，计算得RSD=0.98%。表明仪器精密度符合要求。　　2.7稳定性试验取同一样品溶液于室温下在配制后的0、2、4、6、8、10、12h，按“2.2.1”项下的色谱条件进样测定，测得峰面积分别为1108469、1099351、1120020、1123215、1110362、1109472

6、、1137277，平均峰面积为1115452.3，结果RSD＝1.11％，可见供试品溶液在室温条件下12h内稳定。　　2.8重现性试验取同一样品溶液6份，按“2.2.1”项下色谱条件分别测定测得质量分数分别为10.82％、1083％、10.79％、10.80％、10.81％、10.83％，平均为10.81％，RSD＝0.15％。　　2.9加样回收率试验取益母草碱粗制品3.6mg,用流动相溶解后，精密加入益母草碱对照品0.4mg，溶液适量，置于25mL容量瓶中，以流动相定容至刻度，摇匀。再按样品测定方法操作测定，测得6次的峰面积分别为790165、78649

7、2、807343、810706、799324、813338，平均峰面积为801228，结果计算回收率为100.08％，RSD＝1.54％。　　3讨论　　3.1波长的确定在200～400nm之间进行全波长扫描，发现有两个吸收峰，215nm和277nm，但是215nm有可能受到甲醇吸收的影响，而且在277nm处没有其他成分的干扰，所以选择最大吸收波长277nm作为检测波长。　　3.2色谱条件的建立分别考察了不同体积比的甲醇水、甲醇水三乙胺、甲醇水冰醋酸、甲醇缓冲溶液等流动相，最终选择甲醇缓冲溶液作为流动相。选择用酸性流动相，是因为益母草中益母草碱的

8、存在形式有可能有两种，即益母草碱单体及其盐类，利用酸