western转膜条件

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1、WORD格式可编辑western转膜条件蛋白来源：RAW264.7总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：40~70KDWB用膜类型、孔径：0.45NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400mA转膜时间：60~90minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要， 曾经因为失误，转了15min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。蛋白来源：内皮细胞总蛋白蛋白名称（可保密）：occludin&AKT蛋白分子量：65KD&56KDWB用膜类型、孔径：0.

2、45PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100V转膜时间：60~70min设备名字是“Bio-Radmini”。 蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：65KD&55KDWB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒压12V转膜时间：30-40min设备：“Bio-Radmini”建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。 蛋白来源：293T细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：95KD&35KDWB用膜类型、孔径：PVD

3、F转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压90V-110V，控制电流不要超过300mA。转膜时间：70min 蛋白来源：肿瘤手术标本蛋白名称（可保密）：转录因子蛋白分子量：33KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350mA恒流转膜时间：150min专业知识整理分享WORD格式可编辑转膜设备：湿转Bio-Rad说明：相同条件曾用于数个30-70KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何； 实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：sm

4、ad3蛋白分子量：54KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350mA恒流转膜时间：150min转膜设备：湿转Bio-Rad 蛋白来源：胰腺癌细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16KDaand42KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：120V恒压转膜时间：90min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：72KD，42KD和22KDWB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜0.26A，两张膜0.3A

5、。转膜时间：90min设备：“Bio-Radmini”建议：转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。 蛋白来源：大鼠PBMC蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：55KDWB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜转膜方式（恒流）：湿转转膜时间：60-90min设备：“Bio-Radmini”建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了其它按照常规就好了  其实0.22的膜一

6、般不怕转过头以我们的经验，转膜时间、电压其实 也有很大范围的调整，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过  一张膜转，17KD的和170KD的，按照170KD的条件，17KD的转膜也很好的。蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系专业知识整理分享WORD格式可编辑蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：大于250kDWB用膜类型、孔径：milliporePVDF膜0.45um转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流0.3A。转膜时间：180min设备：“Bio-Rad”建议：电转保持电压在70V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。蛋白

7、来源：白血病细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：28KDWB用膜类型、孔径：0.45的NC膜转膜方式（恒流）：湿转，90min，0.25A设备：“Bio-Rad”建议：海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。 蛋白来源：肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白蛋白分子量：10-200KDaWB用膜类型、孔径：milliporePVDF膜0.45um转膜方式（恒压、恒流）：120v恒压转膜时间：

8、120min转膜设备：湿转Bio-Rad建议：转膜缓冲液只用2次，基本都转上，5%BSA封闭，减少背景。 蛋白来源：胰腺β细胞蛋白名称（可保密）：******蛋白分子量：90-130KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：250mA恒流转膜时