粉葛试管块根诱导技术的研究论文

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1、粉葛试管块根诱导技术的研究论文张帆，祁建军，周丽莉，曲延英，李先恩【摘要】目的建立粉葛无菌苗培养及离体条件下诱导试管块根的体系。方法以粉葛的种子为外植体，MS培养基为基本培养基，培养条件为25℃，2000～3000Lx光照.freelg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖5%。结论无菌离体条件下可以诱导出粉葛试管块根。【关键词】粉葛试管块根诱导技术Abstract:ObjectiveToestablishthesterilizedseedlingcultureandthetesttubeearthnutinductionsyste

2、m.MethodsTheseedofPuerariathomsoniiBenth.ediumasexplantunderthelightlengthof2000～3000Lx12h/dat25℃.ResultsMechanicalbreakcouldefficientlysmashthedormancyofseed.Theshearingainationoffascicledbud.S基本培养基，蔗糖基本浓度为3%，用0.8%的琼脂固化，pH值为5.8～6.0，121℃湿热灭菌15min，材料接种后置于光照培养箱中，培养条件为

3、：25℃，2000～3000Lx光照，12h/d。1.2.2无菌苗的获得将粉葛种子用剪刀剪破种皮，用流水冲洗20min，移入超净工作台上，用75%的酒精进行表面消毒30s，再用0.1%的生汞对种子消毒10min，无菌水冲洗5～6次，将消毒处理的种子置于装有湿润的双层滤纸的三角瓶中，在光照培养箱中培养10h。10h后将吸涨的种子取出用0.1%的生汞进行第2次消毒，消毒时间为6min，无菌水冲洗5～6次后将再次消毒的种子分别移入1/2MS基本培养基，在光照培养箱中进行培养。1.2.3幼苗的增殖培养待种子萌发的无菌苗长至2cm左右时

4、自根部切下，分别进行去除顶芽和不去顶芽两种处理后，移至MS+6-BA2mg/L+NAA0.1mg/L培养基中，在光照培养箱中进行幼苗的增殖培养。1.2.4幼苗的生根当增殖培养的粉葛幼苗长至2～3cm时，自幼苗基部切下，移至1/2MS+IBA1mg/L培养基中进行生根培养。1.2.5粉葛试管块根的诱导当粉葛幼苗的根长至1cm左右时，及时转入试管块根诱导培养基中进行粉葛试管块根的诱导培养。块根诱导培养基为：MS，MS+6-BA1mg/L+NAA1.0mg/L，MS+6-BA2mg/L+NAA0.1mg/L，MS+6-BA2mg/L

5、+NAA1.0mg/L，MS+6-BA3mg/L+NAA0.1mg/L，其中蔗糖浓度均为5%。1.2.6培养基不同蔗糖浓度对块根诱导的影响采用的基本培养基为：MS+6-BA2mg/L+NAA0.1mg/L，在基本培养基中分别加入不同的蔗糖浓度：3%，5%，8%和12%，将根长1cm左右的粉葛试管幼苗移入上述培养基，观察不同蔗糖浓度对试管块根生长的影响。2结果与分析2.1无菌苗培养体系的建立由于粉葛种子具有休眠性，种子灭菌后直接移入发芽床中并不萌发，而采用机械破坏种皮的方法可有效地打破种子的休眠，种子的发芽率达到98.5%。另外

6、，粉葛种子不易彻底消毒，经一次消毒的种子污染率高达85.4%，而两次消毒的方法可大大降低种子萌发时的污染率，使种子无菌萌发率达到45%以上。2.2幼苗的增殖培养增殖培养15d后两种处理的幼苗均长出丛生芽。去除顶芽的粉葛幼苗能长出约8个2cm左右的丛生芽，未去除顶芽的粉葛幼苗萌发约为4个2cm左右的丛生芽，实验证明除去顶芽有利于粉葛丛生芽的发生。2.3植物激素对幼苗不定根增粗及块根形成的影响带有不定根的幼苗移入块根诱导培养基，30d后观察粉葛植株在各种培养基中的生长情况。结果表明：在空白MS培养基中培养的粉葛幼苗，30d后根部继

7、续伸长（5cm左右），未见明显主根，根部没有增粗迹象，其直径小于0.1cm；在生根培养基中生长的粉葛幼苗，根部继续伸长（8cm左右），有明显主根，主根直径约为0.15cm；在MS+6-BA2mg/L+NAA0.1mg/L培养基中，幼苗生出少量不定芽，根伸长不明显（2.5cm左右），也不再长出新的不定根，但块根增粗明显，其直径可达到0.8cm左右（图1）。当培养基中NAA浓度较高时，其植株基部愈伤化严重，幼苗趋于玻璃化，且其块根没有明显增粗现象。增大培养基中6-BA的浓度，幼苗易形成从生芽。因而诱导块根选择含有较低浓度的6-BA

8、和NAA的培养基较为合适。2.4培养基中蔗糖浓度对块根形成的影响带有不定根的幼苗移入不同蔗糖浓度的培养基中10d后观察发现，在蔗糖浓度为3％的培养基中，不定根增粗不明显，蔗糖浓度为5％和8%的培养基中可见块根明显增粗，在蔗糖浓度为8%的高糖含量培养基中，幼苗较矮小，叶片深绿，