双歧杆菌在短肽肠内营养液中的存活力论文

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1、双歧杆菌在短肽肠内营养液中的存活力论文【摘要】目的：研究双岐杆菌在短肽肠内营养液中的存活力.方法：将50g/L两歧双歧杆菌菌悬液加入120g/L短肽营养液中，37℃厌氧培养箱中培养，分别在0,4,8,12,14,16,20,24h时间点取样进行活菌数、A550、酸度和pH测定.结果：在短肽肠内营养液中接种两歧双歧杆菌后，活菌数在培养0～16h生长速度较快，16h达最高峰，以后下降.A550随着时间的延长而增加.酸度也随着培养时间的延长而增加，在培养0～14h之间增加较快，14h以后增加缓慢.pH值随培养时间的延长而下降.freelL，

2、塞上硅胶塞，置于高压蒸汽灭菌器中，于121℃下灭菌10min，切断电源，缓慢排气，冷却后置于冰箱冷藏柜中备用.短肽型肠内营养剂（粉剂）百普素购自荷兰纽迪希亚有限公司,主要成分为水解乳清蛋白、麦芽糖糊精、植物油、矿物质、维生素、微量元素,为淡黄色细粉，略有芳香气，味微苦涩.在无菌操作条件下配制成120g/L的浓度，分装于试管中，每只10mL，塞上硅胶塞.现用现配，为避免营养素破坏，配制好的营养液不能高压蒸汽消毒，采用过滤除菌法.仪器：YQX－Ⅱ厌氧培养箱，净化工作台，2D2A型自动电位滴定仪，6230M酸度计，725s可见分光光度计，

3、立式电热压力蒸汽灭菌器，电热恒温水浴箱，电子天平，Olympus显微镜，电热恒温干燥箱.1.2方法为保证菌种的活力，每月活化1次.方法是在无菌条件下，按1∶9的比例将镜检无杂菌的菌悬液加入双歧杆菌培养基中，37℃厌氧培养48h.按50g/L的接种量将活化后的菌悬液加入120g/L百普素的营养液中，37℃厌氧培养24h.对上述双歧杆菌营养液进行色、味、凝固性以及酸甜比例等感官评定.在无菌操作条件下，将菌悬液0.5mL加入牛奶培养基4.5mL中，37℃厌氧培养，观察牛奶培养基凝固时间.对37℃厌氧培养的双歧杆菌营养液，按0,4,8,12,

4、.freelL于4.5mL无菌生理盐水的试管中，进行10倍梯度稀释，选择适当的稀释度，吸取0.2mL到琼脂培养基平板中，涂布均匀，置于37℃厌氧培养48h，进行菌落计数，并革兰染色观察菌落特征和细菌形态.在无菌操作条件下，定时取样0.5mL，适当稀释，采用比浊法测定A550值，所测A550值乘以稀释倍数即为实际A550值.在无菌条件下取出营养液10mL于50mL小烧杯中，加入蒸馏水20mL，混匀，用校正过的酸度计进行测定.2结果百普素溶液在加入双歧杆菌后仍呈淡黄色，气味芳香，在原有苦涩味的基础上，略有酸味，不凝固.菌落为圆形，半透明，

5、光亮，突起，全缘，质地较软，针尖般大小.在镜下可见革兰氏染色阳性的多形态杆菌，呈Y，V字形，变曲状、刮勺状，其典型的形态是分叉的杆菌，未见其他杂菌（图1）.接种在百普素中的菌悬液凝乳时间为272min.双歧杆菌在短肽营养液中活菌数在培养0～16h之间呈上升趋势，且0～16h生长速度较快，16h活菌含量达到最高峰.A550随培养时间的延长而增加，在培养0～16h之间，A550增加较快，16h以后增加缓慢（图2）.酸度随培养时间的延长而增加，在培养0～20h呈上升趋势，20h达高峰，20h后开始缓慢下降.pH值随培养时间的延长而下降，在培

6、养0～12h之间，pH值下降较快，12h以后下降缓慢（图3）.3讨论在短肽型肠内营养制剂百普素营养液中接种两歧双歧杆菌后，感官性状未发生明显变化，双歧杆菌的形态和菌落形成都比较正常，没有使百普素凝固.凝乳时间与制酸奶的凝乳时间基本相同，表明双歧杆菌在百普素营养液中能够存活.百普素中含有人体需要的各种营养物质，尤其是含有水解乳清蛋白、维生素B1，B2，B6，C，尼克酸，泛酸和叶酸以及盐类，双歧杆菌之所以能在其中生长，可能与此有关.益生菌制品在饮用之前，其益生菌含量必须达到1×109cfu/L以上才能达到保健功效，而新鲜的益生菌制品活菌数

7、要求不得低于1×1010cfu/L才能补偿益生菌在通过人体胃肠道时活菌数的损失［5］.我们发现,双歧杆菌在百普素营养液中培养24hA550值一直处于上升趋势，且16h时活菌数达到7.94×1012cfu/L，达到了益生菌含量的要求.百普素属于中性要素饮食，其pH是双歧杆菌存活的重要条件之一.双歧杆菌不耐酸，在pH在5.0以下生长缓慢［6］.我们发现，双歧杆菌在培养过程中，细菌总数一直在增加，活菌数在0～16h之间繁殖较快，16h后活菌数下降.营养液中的酸度也随着时间的延长而增加，20h后酸度下降.pH随着时间的延长而下降，12h后下降

8、缓慢，可能是由于双歧杆菌对糖的分解而产生大量的醋酸、乳酸和其他有机酸所致.尽管在16h时营养液中活菌数最多，但此时pH已下降到了4.87，不利于双歧杆菌的进一步的存活和繁殖，16h后活菌数下降，在12～14h时pH值在5