茯苓菌种质量标准及检验规程论文

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1、茯苓菌种质量标准及检验规程论文.freell，琼脂20g，水1000ml；将松根（或松木屑）加适量水（以淹没2～3cm为度），煎煮30min，用八层纱布（用水浸湿后拧干）过滤，取滤液静置1h使沉降，取上清液浓缩至约40ml，备用。将马铃薯去皮（挖去发芽薯块芽眼），洗净，切成薄片，用水冲洗干净，称取200g，加水1000ml，煮沸至软而不烂为度，用八层纱布（用水浸湿后拧干）过滤，取滤液。称取琼脂20g，加入马铃薯滤液中，煮至全部溶化。溶液中加入葡萄糖，搅拌溶化，再加入松根（或松木屑）煎汁，并加水补足1

2、000ml，分装于试管或三角瓶中；将配制的母种培养基置高压灭菌锅内，用1.0kg/cm2压力（温度121.3℃）灭菌30min；试管趁热摆放斜面，冷却后，备用。3.2原种培养基原料为小麦粒90%，松木屑10%，营养液（1%蔗糖、0.4%硝酸铵或硫酸铵）；将麦粒精选，除去瘪粒、杂质，洗净，置40℃左右温度的营养液中浸泡10h，取出，滤干。将滤出的小麦粒与5%松木屑混拌均匀，装入400ml盐水瓶或聚丙烯硬塑料瓶内，边装料边振摇，并用扁形铁钩或木棒稍压实，使之均匀装至瓶肩处。将另5%松木屑用营养液润湿，盖

3、在瓶内培养基料表面，厚约0.4cm。用锥形木棒在瓶中扎一直洞约至瓶底，揩净瓶内壁、外壁沾有的物料，塞紧棉塞或具海绵塞的瓶盖。瓶盖外部用二层报纸包裹，用棉索或橡筋进行包扎；将配制的原种培养基置高压灭菌锅内，用1.4kg/cm2压力（温度129℃）灭菌2h，或置常压灭菌灶内，用流通蒸气（100℃）灭菌8～10h；灭菌后慢慢冷却，备用。3.3栽培种培养基（松木屑型培养基）原料为松木屑78%，米糠（或麦麸）20%，蔗糖1%，熟石膏1%，水料比1∶1.0～1.2；首先将蔗糖溶于水中。将米糠（或麦麸）与熟石膏混

4、匀，再加入松木屑，拌匀。然后加入溶化了的蔗糠水，翻拌均匀，使培养基料含水量为44%～70%。即紧握培养基料使指间稍见渗水为度。培养基料配制后放置30min，待水份均匀透入料中，进行装袋。将聚丙烯塑料袋（ф12cm，高24cm，厚4丝）折角呈方底形，把配制的培养基料装入袋中，每袋400g左右，随后压实并抹平表面，揩净袋口内外壁表面沾有的物料，套入硬塑料颈圈，把袋口向外翻出1.4～2.0cm，盖上具海绵塞的塑料套盖，套盖外部用两层报纸包裹，用棉索或橡筋进行包扎；将配制的栽培种培养基置常压灭菌灶内，用流通

5、蒸气（温度100℃）灭菌8～10h，或置高压灭菌锅内，用1.4kg/cm2压力（温度129℃）灭菌2h；灭菌后慢慢冷却，备用。4母种分离与培养4.1分离将预先选好的种苓用清水冲洗至无泥沙，待表面稍干移入无菌室超净工作台上，用0.2%升汞溶液或70%酒精冲洗，进行表面消毒，再用无菌水（通过灭菌处理的清水）冲洗数遍，除去表面药液，打开紫外线灯照射片刻；待种苓表面稍干，用灭过菌的刀具以种苓与培养料（段木）着生部位为中心，纵向切或掰开；用经灭菌的解剖刀或接菌铲挑取长宽各0.4～0.7cm，厚0.1cm一小块

6、白色苓肉，接入试管斜面或培养皿平板母种培养基上。挑取部位为种苓与培养料着生部位对侧，纵轴方向由外向内2～3cm处，依次挑取苓肉，进行分离。用同样方法连续接一批试管或培养皿。4.2母种培养从无菌箱或无菌室内将分离、接种后的试管或培养皿拿出，贴上标签，注明菌种编号、种苓来源、分离接种时间等，然后移入22～24℃恒温箱内培养；分离出的鲜苓块经2d培养，可看到接种块周围长出白色绒毛状的茯苓菌丝。随着培养时间的延长，可见茯苓菌丝在培养基上伸延，在培养过程中若发现有杂菌污染，要及时剔除。4～7d，茯苓菌丝长满培

7、养基表面，即得到一级母种。4.3母种的提纯复壮与扩大培养将培养好的一级母种置无菌室超净工作台上，用无菌操作法，从菌落边缘（即幼嫩菌丝）挑取长宽各0.4～0.7cm左右的菌丝体，移植到另一支母种培养基试管或平板内，于22～24℃恒温箱内培养；培养1～2d即可见茯苓菌丝在培养基上呈放射状生长，且较旺盛致密。平板上可见茯苓菌落特有的同心环纹，试管内可见菌丝呈波纹起伏生长。培养7d左右，大量气生菌丝长满培养基，菌落环纹或波纹消失，并产生特异茯苓香味，即得到二级母种；沿用此种方法，将二级母种先端幼嫩菌丝经转接

8、扩大培养，成为三级母种；茯苓一级母种经1～2次转管扩大培养，起到提纯和活化作用，培养出的二级、三级母种均可用于扩大生产茯苓原种。5原种制备按照“茯苓母种质量标准”选择优质母种，备用。将预先准备的优质母种置接种箱内，用无菌操作法，挑取长、宽各1.4cm左右的菌块（连同培养基），或用打孔器挖取直径1.2cm的菌块。迅速接种移入原种培养基瓶内中央孔边，随即塞（盖）严瓶口，贴上标签；将接种后的原种瓶置22～24℃恒温箱或培养室内培养；培养1～2d，可见母种菌块上的菌丝恢复生长