秋水仙碱的提取纯化.doc

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1、前言：生物碱一般是指来源于植物界的一类含氮有机化合物，广泛存在于自然界，大多具有较复杂的氮杂环结构，并具有生理活性和碱性，是许多药用植物的有效成分，目前用于临床的生物碱药品已达80种之多，相当多的生物碱具有抗肿瘤、低毒性和低成本的特性。生物碱在植物界分布较广，但主要分布在高等植物中，尤其是双子叶植物中的毛莨科、防己科、罂粟科、茄科、夹竹桃科、芸香科、豆科等100多科的植物中。单子叶植物中分布较少，裸子植物中更少，低等植物中的蕨类及菌类只有极个别的植物中存在生物碱。生物碱大多为结晶型固体，只有少数是非结晶型的粉末，一般是无色或白色的化合物，只有少数有色

2、，多具苦味，一般无挥发性，少数有挥发性。秋水仙碱的提取及分离1.秋水仙简介及民间药用情况秋水仙是百合科秋水仙属植物，拉丁名：Colchicumautumnale，多年生草本球根药用花卉，有单瓣和重瓣不同品种。原产于欧洲中部和南部及非洲北部，它的球茎是一个古老的草药，称为“秋水仙”，传统上用于治疗痛风，植株高10厘米左右，8～10月开花。花蕾呈纺缍形，开放时似漏斗，与春天开放的番红花（属鸢尾科）相似，白、粉、淡紫色花朵成丛配植，鲜嫩娇丽，疏密自然，优雅别致。秋水仙喜冷凉阴湿气侯，耐寒。忌粘质土壤，宜排水好、肥沃的沙壤土。球茎夏季有休眠习性。我国自七十年

3、代起从国外引进种子和球茎，分别在北京、庐山、昆明等地试种，已取得可喜成果。由于进口的种球价格昂贵，为加速种球的繁殖，现多采用生物工程栽培技术，通过增殖小鳞茎的数量，扩大种植面积，以适应观赏及药用需要。我国民间常用秋水仙的花及球茎治疗坐骨神经痛和关节炎等。2.秋水仙碱秋水仙碱（colchicine）属于有机胺类生物碱，为淡黄色针状结晶或结晶粉末，口服6毫克秋水仙碱即可致人死亡。但是同时它是很有效的抗肿瘤药物，起作用机制是直接作用于细胞分裂，使纺锤结构无法形成，抑制有丝分裂，使其停止于中期，结果使细胞发育不正常和畸形，最后导致细胞死亡，分裂旺盛的细胞最先

4、受到影响，高浓度时可完全使细胞停止于分裂中期。目前，秋水仙碱在临床上主要用于乳腺癌、肺癌、胃癌、皮肤癌及慢性粒细胞白血病和或起劲病的治疗，此外还可用于缓解痛风的急性发作。秋水仙碱的毒副作用较大，急性中毒后常见症状为剧烈腹痛、腹泻、恶心、呕吐，严重者可致呼吸中枢麻痹而死亡。慢性毒性反应主要表现为对骨髓造血的直接抑制作用，易引起粒细胞缺乏、再生障碍性贫血等。秋水仙碱在人体内由于水解作用代谢很快，排泄也很快，因此只要急救措施得当，急性中毒症状可迅速缓解。3.秋水仙碱的提取及纯化过程在秋水仙花及球茎内含有多种毒性极强的生物碱，主要有石蒜碱、雪花莲胺碱及秋水仙

5、碱（又称秋水仙素）等，这些生物碱中含量最高的是秋水仙碱，在球茎中的含量0.3%~0.5%，秋水仙种子也含多量秋水仙碱，也是提取秋水仙碱的重要原料。另外在我国用山慈菇提取的秋水仙碱注射称“争光81号”用于治疗乳腺癌，取得较好疗效。故常采用山慈菇或秋水仙进行提取，本次用秋水仙进行提取，流程如下：①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩以乙酸乙酯重结晶以氯仿重结晶放置，结晶，抽滤以5倍量乙酸乙酯溶解，过滤蒸馏回收氯仿加无水硫酸钠脱水、过滤以10%硫酸调PH=2,再用氯仿萃取加3~5倍量的水溶解、过滤减压浓缩回收乙醇滤渣回收的乙醇总滤液萃取后的酸性水溶液（含有酸水可溶性生物碱）

6、以80%-90%乙醇加热回流，抽滤，再加乙醇回流提取抽滤，共3次硫酸钠过滤所得水溶液（含总生物碱）不溶物氯仿母液乙酸乙酯溶液氯仿溶液氯仿萃取物（胶状物）不溶物萃取所得氯仿层溶液（秋水仙碱）水溶液（含总生物碱）氯仿母液秋水仙碱粗秋水仙碱秋水仙碱纯品秋水仙粗粉粉末具体提取过程（每一步的作用、显色追踪）：注：秋水仙碱遇浓硝酸显蓝色，以此进行显色追踪，追踪过程中，蓝色是逐步加深的①提取：加60㎏秋水仙粗粉粉末于投料缸中，加80%~90%乙醇180L，加热回流4h,抽滤，再加乙醇回流提取，抽滤，共三次，将三次所得滤液合并。加热回流目的是增大极性大的物质的溶解度

7、，提取出溶于乙醇的有机物；追踪：分别取少量滤液和滤渣，向其中滴加等量浓硝酸，滤液显蓝色，即呈阳性，则保留，滤液滤渣无色，阴性，弃除；②分离：将所得总滤液进行减压浓缩，将（上清液）乙醇和与含总生物碱的胶质水溶液进行分离，并回收乙醇追踪：分别取少量胶质水溶液和上清液，向其中滴加等量浓硝酸，胶质水溶液显蓝色，则保留，上清液不显色证明是乙醇，则回收；③除杂质：向含总生物碱的水溶液加入3~5倍量的水，搅匀后放置，等胶质沉淀后用布袋过滤，胶质用水洗涤三次，洗液与滤液合并，去除不溶物。追踪：分别取少量水溶液和不溶物，向其中滴加等量浓硝酸，水溶液显蓝色，保留，不溶物

8、不显色，弃除；④萃取：滤液用10%硫酸调至pH=2,加氯仿振摇萃取至氯仿萃取液无色为止，氯仿液用5%氢氧化钠