疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝细胞pi3k p85α蛋白表达的影响

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1、疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝细胞PI3Kp85α蛋白表达的影响作者：杨钦河欧健孙升云乔娜丽程少冰陈万群金玲杨环文李娜纪桂元谢维宁林秀峰张玉佩薛川松【摘要】目的观察疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝细胞磷脂酰肌醇3激酶p85α(PI3Kp85α)表达的影响。方法以高脂饮食12周建立大鼠NAFLD模型后，造模组大鼠再随机分为模型组、疏肝组、健脾组、综合组和自然恢复组等5组。治疗组分别给予相应药物灌胃，其他组给予等量蒸馏水灌胃，模型组继续高脂饮食，其余均予基础饲料喂养。治疗8周后，用3%戊巴比妥腹腔麻醉，腹主动脉

2、取血，全自动生化仪检测血脂及肝功，稳态模型法评价胰岛素抵抗程度，光镜下观察各组肝脏病理改变，免疫组化方法检测肝细胞内PI3Kp85α蛋白的表达情况。结果与模型组相比，药物治疗各组及自然恢复组肝脏脂变程度明显减轻，肝功、血脂、胰岛素抵抗均有显著改善（P<0.05或P<0.01），肝细胞内PI3Kp85α蛋白的表达明显减少（P<0.05）。与自然恢复组相比，药物治疗各组肝功、血脂、血糖的改善无显著差异，但肝脏脂变程度减轻，胰岛素抵抗指数明显下降（P<0.05），肝细胞内PI3Kp85α蛋白的表达显著降低（P<0.

3、05）。结论疏肝健脾方药对高脂饮食诱导的大鼠NAFLD有较好的治疗作用，其机制可能是与其降低肝细胞PI3Kp85α的表达有关。【关键词】非酒精性脂肪性肝病胰岛素抵抗PI3Kp85α疏肝健脾方药非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是目前临床上的常见病和多发病，严重影响和威胁着人们的健康。目前认为，它是遗传环境代谢相关性疾病，与中心性肥胖、脂质代谢紊乱、2型糖尿病等代谢综合征疾病密切相关［1］。其发病尚不能以单一的机制解释,可能为多途径、多层次损伤产生的结果，胰岛素抵抗(IR)也被认为是其重要的发病基础。以往的研究发现，疏肝、健脾方药抗脂肪肝

4、作用的效果显著［2,3］。本实验从胰岛素抵抗方面入手探讨上述方药治疗NAFLD的作用效果及其机制。　　1材料和方法　　1.1实验动物　　　　SPF级雄性SD大鼠65只，购自广州中医药大学实验动物中心。实验动物许可证号：SCXK（粤）2005－2004，粤监证字：2007A010，体质量（200±20）g。　　1.2实验药物　　　　柴胡疏肝散：柴胡6g，川芎5g，枳壳5g，陈皮6g，白芍5g，香附5g，炙甘草3g。参苓白术散：人参15g，白术15g，茯苓15g，薏苡仁9g，砂仁6g，山药15g，桔梗6g，白扁豆12g，莲子9g，炙甘草9g。

5、以上方药组成、剂量均参照方剂学［4］。上述药物均为三九制药颗粒剂，购自暨南大学附属第一医院中药房。　　1.3饲料　　　　基础饲料购自广东省实验动物中心，高脂饲料的组成为83%基础饲料，10%猪油，5%蔗糖，1.5%胆固醇，0.5%胆盐。　　1.4实验试剂　　　　游离脂肪酸（FFA）试剂盒购于南京建成生物工程研究所，胰岛素放免试剂盒购于中国原子能科学研究院同位素研究所，PI3Kp85α一抗（兔抗大鼠）及二抗工作液（羊抗兔IgG）购于武汉博士德生物技术公司。　　1.5动物分组与模型建立　　　　大鼠正常喂养1周后，随机分为正常组（10只）、造模

6、组（55只）。正常组给予基础饲料喂养，造模组给予高脂饲料喂养。12周后，随机抽取造模组5只，取肝组织做病理检测。鉴定造模成功后，将造模组随机分为模型组、疏肝组(柴胡疏肝散)、健脾组(参苓白术散)、综合组（柴胡疏肝散合参苓白术散）、自然恢复组，每组10只，用药组灌药剂量据《现代医学实验动物学》［5］确定，其余各组均给予等量蒸馏水灌胃，同时除模型组继续高脂饮食外，其余均予基础饲料喂养。治疗8周后，各组动物于末次给药后,禁食不禁水12h，用3%戊巴比妥腹腔麻醉，经腹主动脉取血，分离血清，迅速摘取肝脏，取相同部位肝右叶组织用多聚甲醛溶液固定。　　

7、1.6指标检测　　1.6.1生化指标用全自动生化检测仪检测血清ALT、AST、TC、TG、LDLC、HDLC、GLU、ApoB100，用FFA检测试剂盒检测血清FFA，血清胰岛素的测定采用放射免疫法。胰岛素抵抗指数（HOMAIR）=空腹胰岛素（μU/mL）×空腹血糖（mmol/L）/22.5，计算值取自然对数变换。　　1.6.2组织病理学检查取固定液固定的肝组织，大小约2cm×2cm×0.3cm，常规石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察肝脏组织学变化。　　1.6.3肝细胞内PI3Kp85α的检测肝组织石蜡切片用免疫组化（SABC法）

8、方法检测PI3Kp85α在肝细胞中的表达及分布情况。　　1.7统计学方法　　计量资料以（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，PI3Kp85α阳性率的比较用χ2检验及Fisher’s确切概率