促红细胞生成素对缺血-再灌注心室肌细胞收缩功能和钙瞬变的影响论文

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1、促红细胞生成素对缺血/再灌注心室肌细胞收缩功能和钙瞬变的影响论文魏来，易定华，张海锋，程亮，谢念林【摘要】目的：探讨人重组促红细胞生成素(rHuEPO)对大鼠缺血/再灌注(I/R)心肌细胞的保护作用.方法：常规酶解法获得成年大鼠心室肌细胞,用氰化钠/乳酸钠灌注造成细胞化学缺氧以模拟缺血.缺血15min后以台氏液或台氏液加rHuEPO复氧模拟再灌注，用可视化动缘探测系统同步检测rHuEPO对单个I/R心室肌细胞收缩力和钙瞬变的影响.结果：发现rHuEPO使再灌注后心室肌细胞肌小节最大收缩幅度、最大缩短速率、最大复长速率

2、以及Ca2+荧光比率增大，使Ca2+达峰值时程、舒张期Ca2+减少50％时程减少(P0.05,n=10，来自8个心脏).结论：rHuEPO可促进I/R心室肌细胞收缩及钙瞬变的恢复而发挥其保护作用.【关键词】重组促红细胞生成素；缺血;再灌注损伤；心肌细胞；收缩功能；钙瞬变【Abstract】AIM:Todeterminetheprotectiveeffectofrebinanthumanerythropoietin(rHuEPO)onischemia/reperfusedcardiomyocytes.METHODS:V

3、entricularmyocytesaticallyisolatedfromadultSDrats.Chemicalanoxicsolutionincludingsodiumcyamide/sodiumlactateulatemyocardialischemia.After15minofischemia,myocytesin.ContributionofrHuEPOtosystolic/diastolicfunctionandintracellularcalciumtransientinisolatedI/Rvent

4、ricularmyocytesotionedgedetectionsystem.RESULTS:Reperfusionplitude,maximalvelocityofshortening,maximalvelocityofrelengtheningofmyocytesshorterningandfluorescenceratioCa2+,anddecreasedtimetopeakCa2+,timeto50%diastolicCa2+paredyocytesfrom8hearts,P0.05).CONCLUSIO

5、N:TreatmenttransientinsimulatedI/Rcardiomyocytes.【Keyia;reperfusioninjury；cardiomyocyte；contraction；calciumtransient0引言近年研究发现.freelanerythropoietin，rHuEPO)预处理能显著改善离体心肌缺血再灌注后血流动力学和心肌酶谱［1］.由于可视化动缘探测系统因其操作简便、直观，可实时同步记录心肌细胞机械功能变化和细胞内钙瞬变等，已成为心肌细胞生理学研究领域应用较广泛的技术之一［2］

6、.本研究利用心肌细胞模拟I/R模型，采用可视化动缘探测系统，同步检测rHuEPO对离体缺血/再灌注(I/R)大鼠心肌细胞收缩、舒张功能和钙瞬变的影响，以探讨rHuEPO对大鼠I/R心肌细胞的保护作用.1材料和方法1.1材料成年SD大鼠12只,体质量220～260g，雌雄不拘,正常饮食（第四军医大学实验动物心）；rHuEPO（沈阳三生制药有限公司）；胶原酶Ⅱ(CollagenaseⅡ，美国（美国Alexis公司）；双激发荧光光电倍增系统可视化动缘探测系统（美国IonOptix公司）.1.2方法1.2.1心肌细胞分离采用

7、戊巴比妥钠(30mg／kg，ip)麻醉并肝素化(1000U／kg，iv)大鼠后，开胸并立即取出心脏，保留足够长的主动脉，以便于插入和固定于灌流系统心脏套管.速置于预冷的无钙台氏液(mmol／L)(NaCl143，KCl5.4，MgCl20.5，NaH2PO40.3，HEPES5.0，葡萄糖5.0,pH7.2,4℃)中.将Langendorff灌流套管套入主动脉(不能套入过长，以免套管逾主动脉瓣插入左心室)并固定，尽快开始灌流.先以预充混合气体的无钙台氏液(pH7.2，以950mL/LO2+50mL/LCO2混合气体饱

8、和)灌流心脏2～3min，使其停跳；再换含0.4g／L胶原酶Ⅱ(270U／mg)和0.7g／L牛血清白蛋白的无钙酶液灌流20～25min.待心脏变松软、灌流液流出速度明显加快后再用无钙台氏液灌流冲洗残留酶液约5min.上述灌流过程中，若心脏一直呈粉红色，表明心肌细胞存活.将心室组织剪下，置于含20g/LBSA的KB液(mmol／L)(左旋谷酰胺