梭曼及其代谢产物的分析方法和应用论文

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1、梭曼及其代谢产物的分析方法和应用论文摘要综述了梭曼及其代谢产物分析方法以及它们在梭曼的毒理学、毒代动力学及毒检中的应用。其中，手性毛细管柱气相色谱法或气质联用仪是实现梭曼四个异构体分离测定的较好手段；对梭曼酸性代谢产物的分析测定可以作为监测梭曼中毒的有力工具。关键词：梭曼；代谢产物；毒代动力学梭曼（soman）是难防难治的神经性毒剂，其主要毒性作用是不可逆地抑制乙酰胆碱酯酶（AChE），使乙酰胆碱（ACh）积聚而产生胆碱能症状，严重中毒者可迅速发生惊厥、呼吸衰竭而导致死亡。梭曼有一个不对称的碳原子和一个不对称的磷原子，因此有四个光学异构体，即c(+)P(+),C(+)P(-

2、),C(-)P(+),C(-)P(-),这些异构体的毒理学特性差别很大。其中，C(±)P(-)对AChE抑制速率比C(±)P(+)快5个数量级.freell血，测定精密度在±10%以内。此方法可作为研究梭曼毒代动力学血中残余量的监测手段，也适用于其他多种有机磷毒剂体内外快速检测。但此方法主要检测的是血中高毒性的梭曼C(±)P(-)异构体，不能精确研究C(±)P(±)四个异构体体内的代谢解毒过程［7］。2.2基于胆碱酯酶抑制的液相色谱检测法Sipponen［8］等用甲醇-水作流动相，在有线性梯度系统的反相色谱将梭曼分离，再用梭曼与胆碱酯酶柱后反应，以残余酶活性与梭曼浓度的线性

3、关系定量梭曼。此方法检测限可达10pg，重复性在±1%，但也不能区分梭曼四个光学异构体而使用受限。3气相色谱（GC）、气质联用（GC-MS）仪检测梭曼四个异构体真正能实现梭曼四个异构体分离测定的是手性毛细管柱的气相色谱法或气质联用仪。Benschop等［9］在1985年就以2H标记梭曼异构体作为内标，用手性毛细管柱分离，氮磷检测器检测实现了梭曼四个异构体的分离测定。检测灵敏度可达250pg。在处理血样时，采用酸化血液（pH4.2），加入铝离子中和氟离子，以及加入特戊基-甲基氟膦酸酯以占据梭曼的结合位点等方法，保持了梭曼四个异构体的稳定性。近年来，热解吸/冷捕获的大体积进样（

4、200μl）毛细管气相色谱法的发展可使梭曼的检测达到100ng/L水平，为研究梭曼毒代动力学提供了有力手段［10］。并适用于沙林、塔崩、vX等神经性毒剂的微量测定。呼吸道染毒是梭曼重要的中毒途径，用手性毛细管柱的气相色谱术可以研究动物呼吸道中毒后梭曼四个异构体的毒代动力学。Benschop等与Langenberg等［11，12］分别用豚鼠研究发现，动物吸入梭曼数分钟，C(±)P(-)异构体在染毒期迅速升高，其浓度-时间关系的数学模型可用非线性回归获得，动力学模型呈不连续过程，即染毒期单幂关系，染毒后期双幂关系。其中，C(+)P(-)较C(-)P(-)异构体吸收相落后，可能是

5、C(+)P(-)较多地与CaE结合的原因。而吸入中毒较等毒剂量静脉给药，梭曼末端半衰期长，可能由于在上呼吸道存在一个梭曼的储存库，染毒终止后又缓慢释放的原因。结合梭曼的测定、血与组织中AChE的测定、梭曼水解率的测定、血与各组织匀浆梭曼结合能力的测定及心输出量与组织血流量的测定等，可以建立起梭曼中毒的毒代动力学生理模型［12，13］。用GC-MS可以灵敏而准确地检测梭曼的四个异构体，在处理血标本时，可以用高氯酸沉淀蛋白，梭曼提取率可达81%［14］。可用此方法研究药物对梭曼异构体体内解毒的影响。Karlsson［15］等研究了钙拮抗剂尼莫地平对抗梭曼兔中毒作用，发现尼莫地平

6、可能通过肺解毒机制，降低了毒性梭曼C(±)P(-)的初始浓度。4梭曼主要代谢产物的检测方法梭曼主要代谢产物是通过酶催化水解和（或）自发水解产生的甲基磷酸频哪基酯（PAMA）。另外，梭曼还可与CaE或BuChE能可逆或不可逆性结合，生成的PAMA由尿排泄。而梭曼对酶不可逆的膦酰化作用则使梭曼代谢产物的毒代动力学过程与沙林、塔崩等其他神经性毒剂不同，表现出更复杂、缓慢、不完全消除的特点。Shih等［4，16］用GC-MS分析了梭曼大鼠皮下染毒后尿中PAMA的排泄速率，发现其呈双相，t1/2分别为3.6h与18.5h，早期排出的是P(+)的水解产物，而后期排出的以P(-)的水解产

7、物为主，总回收率仅为62%，肺是主要的蓄积器官。与酶不可逆结合的梭曼可通过加入表面活性剂（Triton-X100）与10mol/LNaOH，在高温高压下水解后再提取，并用GC-MS测定PAMA来检测。Katagi等［17］应用阴离子交换柱的间接光度检测器的离子色谱术（IPD-IC）检测人血清中的PAMA，线性测定范围为100ng/ml～1μg/ml血清，回收率可达72.9%。另外，Nassar等［18］用毛细管电泳法测定PAMA，定量测定限在500ng/ml以内，回收率可达86%以上，具有样本制备简单、分析迅速等优