hbv感染者il-18基因转录水平及其血清中含量检测的临床意义

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1、HBV感染者IL?18基因转录水平及其血清中含量检测的临床意义董萍　高露　彭海英　马伟军　赵洪礼【摘要】　　目的探讨白细胞介素18(IL?18)在乙型肝炎病毒(HBV)感染中的作用。方法从68例HBV感染者(无症状携带者15例，慢性肝炎患者35例，重型肝炎患者18例)和24例健康体检者血液中分离出外周血单个核细胞(PBMC)及血清，应用RT?PCR及ELISA分别对IL?18基因的转录和血清中IL?18的含量进行检测。结果不同临床类型HBV感染者之间IL?18基因转录水平的差异均有非常显著统计学意义(P<0.01)，重型肝炎组IL?18基因转录水平高于正常对照组(P<0.0

2、1)，无症状携带者组低于正常对照组(P<0．05)，慢性肝炎组与正常对照组比较，差异无统计学意义(P>0．05)。随着病情加重，IL?18水平上升。肝组织炎症活动度不同的慢性肝炎患者之间IL?18基因转录及其血清中的含量表达水平的差异均有显著统计学意义(P<0．05)，肝组织炎症程度越重，IL?18含量越高。结论IL?18可能参与了宿主对HBV的免疫应答，与肝脏炎症程度相关。【关键词】乙型肝炎病毒　白细胞介素18　基因　　　Abstract：ObjectiveToevaluatethepossiblerolesofinterleukin18(IL?l8)inhepat

3、itisBvirus(HBV)infectedindividuals.MethodsPeripheralbloodlymphocytesfromthreegroupsofHHVinfectedindividualsincluding15asymptomaticcarriers,35patientsinanthepatitis,andfrom24blooddonors(asnormalcontrols)onocytes(PBMC)i?quantitivereversetranscriptionpolymerasechainreaction(PCR)andfloetry.Results(1

4、)Thereongthegroupsofinfectedindividuals.Interestingly,itinanthepatitisgroup,andtheloptomaticcarriergroup.Hoalcontrols.TheseverityofthediseasemationinthoseaytakepartinthehostimmunityagainstHBV,andrelatetotheinflammationdegreeoftheliver.　　KeyRNA转录水平和血清中IL?18含量，旨在探讨其在不同类型肝炎患者血清中的变化规律及其与肝功能受损的关系。　　1

5、对象与方法　　1.1研究对象为本院门诊体检及住院HBV感染者68例，女19例，男49例，年龄19～65(32±9)岁，其中无症状携带者15例，慢性肝炎35例，重型肝炎18例。所有病例的诊断均符合2000年9月西安会议制定的病毒性肝炎防治方案的标准[1]。正常对照组24例为健康体检者，女8例，男16例，年龄18～37(27±6)岁，并排除合并感染其他病毒性肝炎。35例慢性肝炎患者均有肝组织病理诊断，肝脏炎症活动度分级，病理诊断及分级标准按文献[1]。　　1.2方法　　1.2.1PBMC分离与mRNA的提取[2]每例受试者取血6ml，常规分离PBMC，用于mRNA检测。采用总RNA提取试剂

6、盒(美国Promega公司)，严格按试剂盒说明书提取。提取出的RNA用紫外分光光度仪测吸光度(A)值，并进行甲醛变性胶电泳，以确定RNA完整性及含量。　　1.2.2RT?PCR检测IL?18mRNA[2]采用反转录聚合酶链反应(RT?PCR)技术。IL?18基因引物和内参照肌动蛋白引物由本实验室自行设计，由上海生物工程公司合成。IL?18上游引物序列为：5′?CGGAATTCATGTACTTTGGCAAGCTT?3′,下游为：5′?CGGGATCCCTAGTCTTCGTTTTG?3′扩增产物490bp。内参照β?肌动蛋白上游引物序列为5′GATCGCTTCCTCGCAACAAACTA3

7、′，下游引物序列为5′ACTGTAGAGATATAATGGACCCCGGAC3′，扩增产物174bp。应用一步法RT?PCR试剂盒(大连宝生物公司)，反应体系：10×Buffer5μL，25mmol/LMgcl210μL，10mmol/LdNTP5μL，RNaseInhibitor1μL，AMVRTaseXL1μL，AMV?OptimizedTaq1μL，SpecificupstreamPCRPrimer1μL，SpecificdoPCRPri