结核病的实验室诊断技术及应用

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1、结核病实验室诊断技术及应用全球范围内结核病疫情急剧恶化全球1/3人口（约20亿）已感染了结核菌，人口的大规模流动结核病与艾滋病同时流行结核菌耐多药菌株的出现我国是世界上仅低于印度和印尼的第三结核病大国患病率高，新发患者93万/年，结核菌感染率为约40％死亡率高，每年死亡人数达13万耐药率高早期快速诊断与治疗成为制约结核病防控的关键因素常规结核病实验室检测方法诊断阳性率不到60％。《摘自2014年中国结核病监测报告》结核病检测技术发展历程分子诊断时代DNA诊断：PCRLAMPGeneXpert基因芯片RNA诊断：TMANASBA免疫学检测

2、：AbAgPPDT-SPOT细菌法：直接镜检体外培养SAT19世纪中叶20世纪60年代20世纪80年代20世纪90年代灵敏度低检测周期长成本低交叉污染仪器要求复杂反应抑制高灵敏度高特异性交叉污染少血清学检测WHO不推荐r-干扰素释放实验结核病检测技术发展历程一、细菌法直接涂片（阳性率低—5000以上细菌/ml；不能区分真假、死活）一、细菌法结核菌的培养结核病病原学诊断的金标准(培养时间长是其软肋)一、细菌学检测的新方法—提高阳性率发光二极管荧光显微镜（LED）液体培养（可同时缩短培养时间）自动化涂片/染色技术（夹层杯法）不能区分真假、

3、死活；培养仍是金标准但耗时长、分枝杆菌固体培养与液体培养比较液体培养（BDMGIT960）固体培养（罗氏L-J）疑似新发患者报阳时间（d）13.63±7.1428.67±10.04复诊患者报阳时间(d)22.94±9.5528.53±10.40疑似新发患者阳性率32.00%17.90%复诊患者阳性率9.30%2.60%污染率6.57%4.0%液体培养在提高阳性率、缩短报阳时间上均优于固体培养。吴学兵，陆彬，桂晓虹等。液体MGIT培养法在结核分枝杆菌检测中的应用评估。检验医学，2013,3（28）：211-214仍然不能满足临床快速诊断的

4、需要二、免疫学检测血清学检测（抗体、抗原）结核菌素试验（灵敏度、特异性？）结核感染T细胞检测（γ-干扰素检测）WHO关于血清学检测声明2011年7月20日，世界卫生组织（WHO）正式声明，要求禁止将血清学检测方法（抗原，抗体，蛋白芯片等）用于肺结核和肺外结核的诊断。WHOwarnsagainsttheuseofinaccuratecommercialserologicaltestsforpulmonaryandextra-pulmonaryTB.蛋白质组学的发展3、4、7种结核杆菌优势表位抗原（16KD、38KD、MPT64、ESAT-

5、6、CFP10、Mtb8、Mtb8.4、Mtb16.3）制备多靶点蛋白微阵列大量的文献报道其敏感性特异性均显著高于涂片与培养法可用于结核病的临床辅助诊断，提高痰涂片和痰培养假阴性的检测率参考文献略γ-干扰素释放实验（IGRAs)10Interferon-GammaReleaseAssays结核杆菌特异抗原：ESAT-6与CFP10由结核杆菌基因组RD1区相同的操纵子编码的蛋白所有的卡介苗（BCG）均丢失RD1和RD2绝大多数的环境分枝杆菌(NTM)也不存在RD1和RD2区11ESAT-6:早期抗原靶6（EarlySecretedAnti

6、genicRarget6）CFP10:培养滤液蛋白10（CultureFiltrateProtein10）12结核杆菌特异抗原：ESAT-6与CFP10结核菌群抗原ESAT6CFP-10Mtuberculosis++Mafricanum++Mbovis++BCGsubstraingothenburg--moreau--tice--tokyo--danish--glaxo--montreal--pasteur--抗原ESAT6CFP-10Mabcessus--Mavium--Mbranderi--Mcelatum--Mchelonae--

7、Mfortuitum--Mgordonii++Mintracellulare--++Mmalmoense--Mmarinum++Moenavense--Mcrofulaceum----Mszulgai++Mterrae--Mvaccae--Mxenopi--环境分枝杆菌MsmegmatisMkansasii--准确—T-SPOT临床诊断性能特异性只针对结核分枝杆菌复合群敏感，与绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗（BCG）无交叉反应美国FDA数据：特异性97.1%(297/306)国内临床数据：特异性94.1%(478/508)灵敏度基本不受免

8、疫力低下/受抑制影响，在肺外结核患者中有很高的检出率美国FDA数据：灵敏度95.6%(175/183)国内临床数据：灵敏度95.3%(624/655)13阴性预测值：93.9%（478/509）阳性预测值：