醋酸乙酯萃取绿原酸过程研究

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1、醋酸乙酯萃取绿原酸过程研究作者：杨海燕，孙海峰，汪爱国，陈福明，郭志刚【关键词】萃取;,,绿原酸;,,纯化　　摘要：对金银花粗提粉中萃取高纯度绿原酸的方法进行了研究。萃取分配系数D测定结果表明，醋酸乙酯是纯化绿原酸的适用溶剂。四级萃取的绿原酸回收率将近90%，得到的产品经UV和HPLC检测绿原酸含量分别为69.1%和35.2%。从LC-MS检测结果推断，产品中含有绿原酸异构体和异绿原酸。　　关键词：萃取;绿原酸;纯化　　StudyofExtractingProcessofChlorogenicAcidbyEthylAcetate　　Abstract：Theextractionmeth

2、odofchlorogenicacid(CGA)fromthecrudehoneysucklepoostsuitableextractantforCGA'spurification.After4-stageextractions,testdateshoentalCGArecoveryratioost90%.TheproductinedcontainingCGA'sisomerandisochlorogenicacidbyLCMStest.　　Keya公司。醋酸乙酯等均为分析纯。美国Agilent公司1100型高效液相色谱。美国Agilent公司8453型分光光度计。Agilent11

3、00型高效液相色谱-ESQUIRE2000型离子阱质谱检测仪。质谱扫描条件：离子化源为电喷雾离子化源ESI，检测方式为二级质谱，全范围为50～2200m/z，加热毛细管温度为300℃。　　1.2工艺流程金银花粗提粉→水溶→醇沉→蒸去乙醇→醋酸乙酯萃取→减压浓缩→冷冻干燥金银花粗提粉水溶液的醇沉过程本文作者已进行了详细研究，确定最佳醇沉度为60%，醇沉可有效去除金银花粗粉中的杂质,有关研究另文陈述。醇沉后离心过滤，回收乙醇，剩余液用盐酸调节pH后进行萃取。　　1.3绿原酸含量测定　　1.3.1UV法准确称取绿原酸标品10mg，用50%甲醇定容至100ml，分别用50%甲醇稀释10，5，

4、3.33，2.5，2，1.67倍，以50%甲醇为空白，用1cm比色杯于327nm波长处测吸收度。以吸光度为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标，绘制绿原酸标准工作曲线，得到回归方程：Y=18.302X，r=0.9995。绿原酸含量在10.0～60.0μg/ml，范围内，浓度与吸光度间呈良好的线性关系。　　1.3.2HPLC法含量测定色谱条件：参照2005年版《中国药典》附录中绿原酸的高效液相色谱法［3］。色谱柱：ZORBAXC18ODS（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）；检测波长为327nm；柱温：25℃；进样量：20μl。线性回归方程：Y=4

5、8.64X-52.57，r=0.9991。绿原酸在26.0～173.3μg/ml与峰面积呈良好的线性关系。　　1.4总糖含量测定采用蒽酮硫酸法［4］。线性回归方程：Y=196.96X，r=0.9989。总糖在5.0～100.0μg/ml范围内，浓度与吸光度间呈良好的线性关系。　　2结果与分析　　2.1原料含量分析将金银花粗提粉制成供试液，其中总糖含量为43.33%，总绿原酸含量为12.0%，绿原酸含量为5.5%（HPLC测定）。　　2.2金银花粗提粉在醋酸乙酯水体系中的D值测定预先配制醋酸乙酯与去离子水体积比为1∶1混溶分相后的上、下相。随后称取10g粗粉，溶于100ml配制好的下相

6、中，用浓盐酸调节pH=2.0，量取50ml该溶液，加入到100ml分液漏斗中，加入等体积预先混溶过的醋酸乙酯，充分振摇20min，达到平衡后，分出上、下相，分别取1ml用甲醇稀释测定浓度。测得在醋酸乙酯-水体系中的萃取分配系数D=0.69。参考绿原酸在其它溶剂体系［5］的D值（见表1）可以看出，绿原酸在醋酸乙酯里的分配比较大，醋酸乙酯较正丁醇而言，沸点低，便于回收溶剂，且价格低廉。　　表1绿原酸在不同溶剂体系的D值（略）　　2.3pH对萃取结果的影响分别称10g金银花粗提粉配成50ml水溶液，用一定浓度的盐酸溶液分别调pH值为1.0，2.0，7.0，用醋酸乙酯按相比1分别称10g金银

7、花粗提粉配成50ml水溶液，用一定浓度的盐酸溶液分别调pH值为1.0，2.0，7.0，用醋酸乙酯按相比1∶1四级错流萃取，各自合并上相。用紫外测定产品中的总绿原酸和总糖量。结果见表2。1四级错流萃取，各自合并上相。用紫外测定产品中的总绿原酸和总糖量。结果见表2。　　表2不同pH条件下萃取测定结果（略）　　结果表明，pH小于2的酸性条件下绿原酸的萃取收率高，表明绿原酸以分子酸的形式更容易被萃取到有机相，但相应的产品中测到总糖含量也较高，分析认为，除了由于粗提