补肾健脾法对骨质疏松大鼠骨组织形态学影响的实验研究

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1、补肾健脾法对骨质疏松大鼠骨组织形态学影响的实验研究作者：倘艳锋陈久毅李玉雄罗永红黎喜平徐远坤【摘要】　　目的研究补肾健脾法对骨质疏松症大鼠骨组织形态学改变的影响。方法取10月龄大鼠36只随机分成3组：补肾健脾组（BSJP）、正常组、模型组。BSJP组及模型组无菌条件下摘取双侧卵巢制造骨质疏松模型，正常组采取假手术。术后1周开始给药，12周后处死。取大鼠股骨远端1/3近关节部位,制作不脱钙骨切片,进行骨组织形态学研究。结果BSJP组大鼠静态组织学各项参数与模型组比较,有显著差异(P<0.01);动态组织学各项参数与模型组比较,有显著差

2、异(P<0.01)。结论中医药补肾健脾法可以明显降低破骨细胞活性,抑制绝经后骨质疏松症的高转换率，能够有效地防治骨质疏松症。　【关键词】补肾健脾；骨质疏松；骨组织形态学　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofthemethodofBuShenJianPionbonehistoncorphometryinosteoporosisrats.MethodsThirtysixratsaged10monthslydividedintothreegroups:BuShenJianPi(BSJP)group,v

3、iodgroupandmodelgroup.TheBSJPandmodelgroupsedovariectomyonbothsides,thevoidgroupratslyoperated.Afteroneedicinesoralnearthejointetryofbone.ResultsThestaticanddynamichistoncorphometricparametersinBSJPgrouphadsignificantdifferenceasparedodelgroup(P<0.01).ConclusionThemeth

4、odofBuShenJianPicaninhibittheactivityofosteoclasticclearly,andinhibitthehighsenopause.　　Keyl），北京新光化学试剂厂生产；邻苯二甲酸二丁酯（500ml），浙江杭州临平化工厂生产；过氧化苯甲酰（500g），上海中利化工厂生产；氢氧化钠（500g），广州市化学试剂公司生产；无水乙醇（500ml），成都金山化学试剂有限公司产品；四环素（5ml）由北京天根生物有限公司提供；甲苯胺蓝（25g），由上海化学试剂厂生产。电动搅拌机（99－1），金坛市富化仪器有限公

5、司生产；荧光图象分析系统（LEiCADM2500）德国LEIca公司产品；重型硬质切片机（MOD.K），西德产；电子天平（EL104）梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司产品。　　1.3动物造模将补肾健脾（BSJP）组与模型组动物用7％水合氯醛300mg/kg腹腔注射，麻醉生效后沿后正中线切开皮肤约1.5～2cm，肋弓下脊柱旁开1cm处切开肌肉，打开后腹膜即可见到位于肾脏后下方的脂肪团，将其轻柔提出，找到粉红色的卵巢，分离其周围脂肪，用4号丝线结扎其下方的输卵管血管［1］。将卵巢完整取出，放入固定液固定。取出双侧卵巢后逐层缝合，以600万u

6、/100ml青霉素注射于手术处，每侧1ml。正常对照组行假手术，仅取卵巢旁的部分脂肪即可关闭伤口。术后青霉素肌注6万u/只，1次/d，连续3d。每组取3个卵巢标本行病理切片，常规HE染色，确保为完整卵巢组织。　　1.4动物用药造模成功后适应性饲养1周。BSJP组给予补肾健脾方（中药由贵阳中医学院第一附属医院提供）水煎剂，15ml/kg，1次/d。每4周后停用1d，重新称量体重调整用药量。模型组及正常对照组灌服蒸馏水，15ml/kg，1次/d。　　1.5标本采集每组动物处死前用四环素进行标记，40mg/(kg·d)。首次在处死前第9天给药，

7、第2次在处死前第3天给药。四环素标记后将大鼠用7％的水合氯醛300mg/Kg进行腹腔内注射，麻醉生效后无菌条件下取出一侧股骨下端近关节段，将周围软组织剔除干净，立即放入40％酒精中固定，置于4℃冰箱。标本采取后将动物拉颈处死。　　1.6不脱钙骨切片的制作［2］①固定：标本采取后立即固定于40％酒精中，保存于4℃冰箱中。固定24h；②脱水：固定后以40％，70％，80％，95％，100％乙醇系列脱水各2次，24h/次；③透明：于二甲苯中透明24h；④渗透：将透明过的标本依次入MMAⅠ液、MMAⅡ液、MMAⅢ液进行渗透，48h/次；⑤包埋：在

8、适中的包埋器在中，将骨标本浸于新鲜配置的包埋液中，置包埋器于40℃恒温箱中12h，然后置于室温下直至包埋液硬化。放于4℃冰箱内保存；⑥切片：修整包埋标本块用重型切片机切片。切片时用40％酒精湿