蓖麻根提取物对hepg2.2.15hbsag和hbeag表达和抗菌作用的研究论文

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1、蓖麻根提取物对HepG2.2.15HBsAg和HBeAg表达和抗菌作用的研究论文唐祖年，徐雅娟，冯梅，李勇文【摘要】目的探讨蓖麻根提取物对HepG2.2.15细胞株HBsAg和HBeAg表达的影响与抗菌作用。方法采用HepG2.2.15细胞系培养系统检测蓖麻根提取物对HBsAg和HBeAg表达的影响;用平板法对提取物连续稀释测定其最低抑菌浓度。结果蓖麻根两种醇提物孵育HepG2.2.15细胞株72h后均能抑制HBsAg和HBeAg的表达(与正常对照组比较P0.05或P0.01)，其抑制效应呈浓度依赖性，其中50%醇提物在200mg/L和100mg/L抑制HBsAg的表达分别为100%

2、和67.2%。蓖麻根提取物的最低抑菌浓度(MIC),以50%乙醇提取物对金黄色葡萄球菌第3和4株、表皮葡萄球菌、大肠杆菌第2株的抑制作用较强(MIC均为19.5μg/ml)。其次是金黄色葡萄球菌第2株、大肠杆菌第3株、甲型和乙型链球菌、酿脓链球菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌(MIC均为39.1μg/ml)，而95%醇提物的抑菌作用较弱。结论蓖麻根醇提物具有体外抗乙肝病毒和抑菌作用。【关键词】蓖麻根提取物;HepG2.2.15细胞株;HBsAg;HBeAg;抗菌作用蓖麻RicinusmunisL.，为大戟科植物.freelresco公司产品;HBsAg、HBeAgELISA检测试剂盒为上

3、海容盛生物技术有限公司，批号为20070202和20070407;其余为分析纯试剂。二氧化碳培养箱(MCO3/15AC，日本三洋公司);倒置显微镜(XSB3/IA，上海);96孔细胞培养板(Gorning美国)。菌种：金黄色葡萄球菌4株为广西医科大学提供;白色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌3株、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、丙型溶血性链球菌、酿脓链球菌、肺炎链球菌、铜绿假单孢菌由桂林医学院微生物教研室提供;隔水式电热培养箱GNP-9270(上海精宏实验设备有限公司);蒸气高压灭菌锅MLS-3020(日本日立);水解酪蛋白琼脂为杭州天和微生物试剂有限公司提供。蓖麻采自桂林地区。

4、2方法2.1蓖麻根的提取蓖麻根500g粉碎，以6倍95%乙醇加热回流提取3次，每次1h，合并滤液，旋转蒸发仪浓缩干，置烤箱50℃烤干备用。另取500g蓖麻根，以50%乙醇加热回流提取3次，浓缩与干燥同上。2.2HepG2.2.15细胞株的培养与分组在RPMI1640中加入380mg/LG418，10%胎牛血清，2mmol/L谷氨酰氨，100U/ml青霉素和100mg/L链霉素接种于培养瓶，置37℃、5%CO2的培养箱中常规培养。待细胞约80%融合时，进行传代培养。将对数生长期的HepG2.2.15细胞按104/ml接种于96孔细胞培养板中，每孔180μl，待细胞贴壁(24h)后加药，

5、分为5组：空白对照组，加入10%FBS的RPMI1640培养基;蓖麻根95%乙醇提取物各剂量组(400，200，100，50)mg/L;蓖麻根50%乙醇提取物各剂量组(400，200，100，50)mg/L;每个浓度设3个复孔，每孔20μl，37℃，5%CO2培养箱孵育72h后测定培养基上清液中HBsAg与HBeAg的含量8。2.3HBsAg与HBeAg含量的测定按照HBsAg，HBeAg的ELISA试剂盒说明，用波长为450nm酶标仪测定HepG2.2.15细胞株培养基上清液中HBsAg与HBeAg的吸光度A值，计算蓖麻根提取物对HBsAg、HBeAg表达的抑制率。抑制率(%)=(

6、实验孔P/N-对照孔P/N)÷(对照孔P/N-2.1)×100%9。注：P/N为HBsAg或HBeAg的阳性孔A值/阴性孔A值。2.4MTT法测定药物对细胞的毒性：用MTT法测定细胞数以反映药物对细胞的毒性。培养结束前4h，每孔加入5g/L的MTT溶液20μl，继续孵育4h后中止培养，去培养液，每孔加入150μLDMSO，室温下静置5～10min后，待formazan完全溶解后，用酶标仪在570nm波长下测定吸光度A值10。计算细胞存活率及治疗指数。细胞存活率(%)=实验孔A值/对照孔A值)×100%;治疗指数(TI)=TC50/IC50。注：TC50是实验孔存活细胞为对照孔50%时

7、的药物浓度，当TI2为有效低毒;12.5体外抗菌的样品处理蓖麻根50%乙醇提取物用灭菌蒸馏水配制，95%乙醇提取物用DMSO配制，经34.475KPa灭菌10min，50%乙醇提取物用灭菌的蒸馏水把药物配成系列浓度，再将系列样品浓度以1∶10加入含血清肉汤琼脂培养基(因甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、丙型链球菌、酿脓链球菌、肺炎链球菌营养要求较高，需要血液和血清等营养物质才能生长良好)和含普通肉汤琼脂培养基内径75mm的平板内，使最终两个样品琼脂含药浓