环境卫生学监测及标本采集方法

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1、环境卫生学监测及标本采集方法一、医院感染微生物学监测医护人员手、空气、物体表面消毒剂卫生学监测血液透析相关监测压力蒸汽灭菌效果监测医院环境卫生学监测医院消毒灭菌及医疗用品效能监测内镜消毒灭菌效果监测医疗用品的监测微生物标本的采集二、样品采集原则医院重点部门的医护人员手、空气、物表的微生物学监测应在清洁或消毒以后，医疗操作前进行。如遇有医院感染流行或疑似环境污染时，则需要立即进行监测，通过环境微生物检测，可以及时发现传染源及传播途径。测定物品污染程度或考核消毒措施的效果，都以样品所含微生物的数量来计算。因此样品采集要有代表性。送检时间一般不超过2小时。

2、三、医院各重点部门空气，物体表面，医护人员手细菌数标准。环境类别范围标准空气（cfu/m3）物体表面（cfu/cm2）医务人员手（cfu/cm2）I类层流洁净手术室、层流洁净病房≤10≤5≤5II类普通手术室、产房、新生儿室（母婴同室病房）、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房≤200≤5≤5III类儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间≤500≤10≤5IV类传染病房－≤15≤15以上不得检出致病性微生物，如乙型溶血性链球菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌等。四、所用材

3、料无菌吸管（0.5ml、5ml、10ml）、L棒、棉拭子、规格板、普通琼脂平板、10ml生理盐水等五、采样方法1、手卫生监测：采样时间：一般情况下每季度监测一次。当发生医院感染流行、高度怀疑或确定与医务人员手的污染有关时，应及时进行监测。常规监测在洗手后从事治疗操作前，特殊监测随时采样。采样方法：棉拭子涂布法和直接压印法，棉拭子涂布法被检人五指并拢，用浸湿灭菌生理盐水的棉拭子在医护人员手指曲面从指根到指端往返涂擦2次，并随之转动采样棉拭子，采完后剪去操作者手接触部分，将棉拭子投入10ml灭菌生理盐水试管内立即送检。棉拭子涂布法棉拭子涂布法棉拭子涂布法

4、棉拭子涂布法检验方法：1、将每个采样管敲打80次或1分钟，2、用灭菌吸管取0.2ml于营养琼脂平板中，再用无菌L棒涂布整个平板表面，置36℃±1℃温箱培养24小时观察结果计算菌落数计算方法：菌落数/C㎡=平均菌落数×稀释倍数采样面积×0.2手消毒效果要求：卫生手消毒，监测的细菌菌落总数应≤10cfu/c㎡外科手消毒，监测的细菌菌落总数应≤5cfu/c㎡直接压印法：采样时被检人5指并拢，将平皿上培养基表面直接压贴在手掌根部至指尖曲面10～20秒后送检。将所采样本直接置36℃±1℃温箱培养24小时，根据平皿面积计算细菌总数。菌落数/C㎡=平皿上菌落平均数

5、平皿面积（C㎡）2、空气采样可根据自身条件选用沉降法（空气暴露法）或空气采样器法。采样时间：采样时选在消毒处理后，操作前进行采样，采样前应关好门窗，在无人走动的情况下，静止10分钟进行采样。沉降法：A：布点方法：室内面积＞30m2设四角及中央5点，4角的布点位置距墙壁1m处，离地面垂直高度为80-150cm。室内面积≤30m2设内、中、外对角线3点，内、外点的布点位置距墙壁1m处，离地面垂直高度为80-150cm。B：采样方法：将普通营养琼脂平板或血平板（直径9cm）放在室内各采样点处，采样高度距地面1.5m，内外及四角距墙1m，采样时，将平板盖打开

6、，扣放于平板旁，暴露5分钟，盖好并将平皿置于37℃温箱培养，24小时观察结果，并计算5个平板的平均菌落数。洁净手术室则暴露30分钟。计算公式：菌落数/m3＝50000NATA＝平板面积（C㎡）T＝平板暴露于空气的时间（min）N＝平均菌落数3、物体表面的采样采样时间：根据采样目的选择采样时间，如进行常规物体表面监测，选择消毒处理后4小时内进行采样，若是暴发流行时的环境微生物学监测则尽可能对未处理的现场进行采样。采样面积：常规监测时被采面积＜100cm2，取全部表面；≥100cm2，取100cm2。暴发流行时采样不受此限制。所用材料：（1）棉拭子采样法

7、对于平面物体，用5cm×5cm大小的标准灭菌规格版，放在被检物体表面，用用浸湿灭菌生理盐水的棉拭子在规格版内横竖往返均匀涂抹各5次，并随之转动棉拭子，连续采样1－4个规格板面积。用无菌剪刀剪去手接触部分，将棉拭子装入放有10ml灭菌生理盐水试管中。对于门把手，金属，玻璃等曲面小型物体则采用棉拭子直接在物体表面按一定顺序涂抹采样，敷料，卫生纸等一次性物品采样时，用无菌法取样品5g，放入装有10ml灭菌生理盐水试管中。检验方法：1）将采样管敲打80次（或1分钟）2）用灭菌吸管吸取0.2ml于营养琼脂平皿中，然后用无菌L棒涂在整个平皿表面，置36°C温箱2

8、4小时观察结果。计算公式：菌落数/C㎡＝平均菌落数×稀释倍数采样面积×0.24、透析液微生物监测检测方法：用