牡蛎糖胺聚糖对h2o2所致血管内皮细胞氧化损伤的保护作用论文

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1、牡蛎糖胺聚糖对H2O2所致血管内皮细胞氧化损伤的保护作用论文【摘要】目的了解牡蛎糖胺聚糖（OGAG）对过氧化氢所致血管内皮细胞（VECs）氧化损伤的保护作用及其机制。方法采用人脐静脉内皮细胞株ECV304体外培养的方法，建立H2O2诱导的血管内皮细胞损伤模型，实验分为正常对照组、损伤模型组（过氧化氢50mg/L）、肝素组（肝素200mg/L，过氧化氢50mg/L）、OGAG保护组（OGAG10、50、100、200、400、800mg/L，过氧化氢50mg/L）、OGAG对照组（OGAG100、200、400mg/L）。采用噻唑蓝（MTT）比色法观察OGAG

2、对血管内皮细胞增殖活性的影响,黄嘌呤氧化酶法检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果与正常对照组相比，损伤模型组细胞的增殖活性和SOD的活活性均明显降低(F=137.23、135.40,q=5.26、5.34，P0.01）,而OGAG对照组（100、200mg/L）的细胞增殖活性明显增高（q=3.40、3.81,P0.05）。与损伤模型组相比，OGAG各保护组（50～800mg/L）细胞增殖活性明显增加（q=3.40～5.23,P＜0.05、0.01）.freelinoglycan(OGAG)ontheinjuryofvascularendothelialcel

3、ls(VECs)inducedbyhydrogenperoxideanditscorrespondingmechanism.MethodsTheendothelialcellstrainfromhumanumbilicalveinodelofVECsinjuredbyhydrogenperoxide(H2O2)alcontrolgroup,OGAGcontrolgroup(OGAG100,200,and400mg/L）,H2O2injurygroup(H2O250mg/L),heparingroup（heparin200mg/L，H2O250mg/L）andOG

4、AGprotectivegroup（OGAG10,50,100,.freelg/L，H2O250mg/L）.InfluenceofOGAGonproliferateactivityofVECseansofMTTassayandlevelsofSODalcontrolgroup,theproliferateactivityofVECsofOGAGcontrolgrouparkedlydecreased(F=137.23,135.40；q=5.26,5.34;P0.01).paredoresignificantlyincreased(q=3.40-5.11；P0.05

5、，0.01).ConclusionOGAGcanprotecttheVECsfromH2O2inducedinjury,andthepossiblemechanismmayrefertotheincreasingofSODactivityintheinjuredVECs.［KEYEM培养基，美国Hyclone公司；胎牛血清，中国医学科学院生物工程研究所；胰酶，美国华美生物工程公司；肝素，上海生化制药厂；H2O2，山东高密制药厂；噻唑蓝，Sigma公司；二甲亚砜，Amresco公司；超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒，南京建成生物研究所；酶标仪，英国Tecan公司；7

6、21B型紫外线分光光度计，上海第三分析仪器厂；人脐静脉内皮细胞株ECV304，用DMEM含高糖培养基(含体积分数0.10胎牛血清)在含体积分数0.05CO2的细胞培养箱中，37℃常规培养，实验采用传代细胞。1.2实验方法1.2.1实验分组实验共分12组：正常对照组（1组）、损伤模型组（2组，过氧化氢50mg/L）、肝素组（3组，肝素200mg/L，过氧化氢50mg/L）、OGAG保护组（4、5、6、7、8、9组，OGAG浓度分别为10、50、100、200、400、800mg/L，过氧化氢50mg/L）、OGAG对照组（10、11、12组，OGAG浓度依次为10

7、0、200、400mg/L）。1.2.2培养条件将传代的VECs按108/L接种于96孔板，至汇合状态时,换成无血清的DMEM培养基，同时肝素组、OGAG保护组和OGAG对照组分别加入相应浓度的药物给予处理，培养24h后，损伤模型组、肝素组和OGAG保护组分别加入含H2O2(终浓度为50mg/L)的培养基，12h后终止培养。1.2.3细胞增殖活性测定采用MTT法。细胞终止培养后加入MTT20μL,继续孵育4h后，每孔加入200μL的二甲亚砜，振摇，置于酶标仪测定570nm处各孔吸光度（A），分析细胞的增殖活性。1.2.4SOD活性的