嘌呤类药物作用及巯基嘌呤甲基转移酶遗传多态性的研究进展论文

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1、嘌呤类药物作用及巯基嘌呤甲基转移酶遗传多态性的研究进展论文.freeleMP’6-meTGMP’6-meTIMP’这些甲基化的化合物属于“无活性”的物质’它们能够抑制磷酸核糖焦磷酸化氨基转移酶(PRPP-AT)的活性’后者是细胞重新合成嘌呤步骤中的关键酶’因此’抑制PRPP-AT的活性就阻断了肿瘤细胞遗传信息的表达’从而达到抗白血病的作用。③由黄嘌呤氧化酶催化形成6-硫基黄嘌呤后再形成尿酸也可生成尿酸排出。6-TG的代谢途径：①由HPRT催化直接形成硫基鸟嘌呤磷酸化合物(TGNs)发挥抗白血病作用。②也可由TPMP催化生成甲基化的产物如6-meTG’或me-TGMP

2、’达到抗肿瘤的作用。但组织中TPMP对6-TG的催化效力远比6-MP低(约为1/12)［4］，故此过程并非6-TG的主要代谢途径。③6-TG由鸟嘌呤脱氢酶催化生成6-硫基黄嘌呤再由黄嘌呤氧化酶催化生成尿酸排出。2TPMT的酶学特点2.1TPMT的组成结构：由两个具有相同的催化功能单体组成’说明TPMT的结构并非引起遗传多态性的原因。TPMT的分子量大约为30000。通过提取和分析人肾脏组织中的TPMT’发现它由245个氨基酸残基组成。另有人还发现几乎每个依赖SAM的甲基转移酶均含有3个结构保守的序列(motifⅠ，Ⅱ，Ⅲ)，分别含24-.freelenten曲线。同

3、时’Kryski等［11］发现在一般组织中(肝、肾等)酶作用最佳pH值为7.5’而血液中为6.7。2.4TPMT的底物及抑制物：Kryski等做了18种6-MP和6-TG衍生物的酶学实验’包括它们的核苷酸和核糖核酸’描述了它们的反应特性：大多数的衍生物均可作为TPMT的底物’它们的酶促动力学特性均符合Michaelis-menten曲线’发现6-MP比6-TG与酶结合的能力强。在所有前体药物(6-MP’6-TG)和衍生物中’8-羟基-6-MP和6-TG分别是两个药物家系中活性最大者’而它们的核苷酸盐类则是这些化合物中活性最低的’其原因可能是它们较易被水解。Mcleo

4、d等［10］发现当化合物中7’9位被烷基化后’其与酶结合的能力有所加强。同时发现前体药物的Km、Vm和Km/Vm值均比其衍生物低’说明6-MP和6-TG并非TPMT的自然底物。另外’6-硒基嘌呤(Selenopurine)及其衍生物也可以作为TPMT的底物’但是它们的Km和Vm值均显著比硫基嘌呤及其衍生物低。黄嘌呤8位上有-OH基者是底物，而2位上有-OH则为抑制物［12］。除2-OH-黄嘌呤外’S-腺苷-L-半胱氨酸、Sinefungin、6-甲基硫基嘌呤、3，4-双甲氧-5-对羟基苯甲酸为TPMT的抑制物［2］。3TPMT的遗传多态性从人类T84结肠癌患者细胞中

5、提取分析DNA及cDNA寡核苷酸探针筛查文库’发现TPMT基因总长为3.4kb’编码序列总长2.7kb’开放阅读框架含735个碱基。国外多个文献调查显示’大约有89%的人TPMT酶活性＞6U/mlpRBC’属于高活性’而11%的人酶活性为1～5U/mlpRBC’属于中度活性。而大约1/300的人活性低于1U/mlpRBC或其活性无法测出。造成这种结果的原因是编码TPMT的核苷酸碱基顺序发生点突变’而是否有染色体易位或丢失尚无文献报道。美国和英国学者已在白种人中发现和克隆出两个点突变位点’分别命名为TPMT*2和TPMT*3。其中前者是核苷酸序列中第238位的鸟嘌呤(

6、G)→胞嘧啶(C)’使得氨基酸序列第80位的Ala(丙氨酸)→Pro(脯氨酸)’后者是第460位的鸟嘌呤(G)→腺嘌呤(A)’第719位的腺嘌呤(A)→鸟嘌呤(G)’结果是氨基酸序列第154位的Ala→Thr(苏氨酸)’第240位的Tyr(酪氨酸)→Cys(半胱氨酸)’这样就造成了酶活性的减低或丧失，从而导致在使用6-MP时形成高浓度的TGNs’引起明显的造血组织细胞毒性’产生严重后果’甚至引起死亡。两种突变类型中’TPMT*3出现的频率占两种类型的70%，而TPMT*2占30%［13’14］。4影响TPMT活性的因素4.1种族特异性：美国弗罗里达州黑种人平均TPM

7、T酶活性为8.64±3.47U/mlpRBC’未发现缺陷患者。而白种人平均为12.3±3.88U/mlpRBC’酶活性的分布比例与前述类似［15］。Mcleod等［16］发现白种人的酶活性平均值为16.8U/mlpRBC’黑种人则为14.4U/mlpRBC(P＜0.001)。法国人平均15.4±7.0U/mlpRBC’其TPMT遗传多态性的分布和美国人相同［1］。新加坡的调查显示’健康华人中TPMT的多态性结论和美国人相似’而实际的数值却大大超过了国外报道的结果［17］。挪威Saami人的平均值为17.0±3.3U/mlpRBC’白种人为13.1±2.9U/ml