不同产地丹参遗传关系的dna标记分析

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1、不同产地丹参遗传关系的DNA标记分析作者：徐红，王燕燕，王峥涛，胡之壁【摘要】目的分析不同产地丹参的遗传背景与遗传关系，为丹参药材的栽培育种提供依据。方法采用RAPD与ISSR标记对4个产地的野生丹参、6个产地的栽培丹参共计50个样本进行分析，利用分析软件计算遗传相似性，建立遗传聚类图。结果DNA标记共检测了102个位点，多态条带比率（P）为95.10%，栽培丹参的P值高于野生丹参；居群的总遗传变异Ht为0.2389；UPGMA聚类可以将不同来源的丹参很好地区分开来。结论不同产地间的丹参存在丰富的遗传多样性，丹参种质在遗传背景上较为复杂，不同

2、产地的丹参已出现明显的遗传分化，但是与地理分布没有相关性。【关键词】丹参；遗传关系；DNA标记　　Abstract：ObjectiveTostudythegeicbackgroundandrelationshipofSalviamiltiorrhizaefromdifferentpopulation,andprovidereferencefortheseedselectionandcultivation.MethodsGeicrelationshipoftotal4iltiorrhizaeoleculardendrogramarkersorp

3、hicloci(P)berofPamongcultivationpopulationfromtheclusteringofUPGMAshoiltiorrhizaefromdifferentpopulationshoongdifferentS.miltiorrhizae,butthegeicrelationshipsdidnotshoiltiorrhizae;Geicrelationship;DNAmolecularmarkers　　丹参SalviamiltiorrhizaBge.为唇形科多年生草本植物，具有活血化瘀、消肿止痛、养心安神等功效，

4、常被用于单方、成药、保健品及化妆品，是我国重要出口大宗药材之一。近年来，随着野生资源的减少，野生丹参已远远不能满足临床用药需求，全国许多地区开始栽培丹参，目前栽培品成为丹参的主要来源。但是由于丹参分布范围广，各栽培地区种源来源不同，以及长期无性繁殖导致的品种退化，给丹参的栽培和育种工作造成困难，同时也严重影响丹参的产量与药材的质量。本研究利用RAPD与ISSR标记对不同产地的野生与栽培丹参的遗传变异进行分析，以期为丹参药材的引种栽培与科学选育提供科学依据。　　1仪器与材料　　1.1材料分别收集于我国丹参药材的主产区四川、山东、江苏、陕西、安徽

5、及山西等地的野生和栽培药材，见表1。药材标本现存于上海中医药大学中药研究所，由吴立宏博士鉴定药材原植物学名。　　1.2仪器与试剂PTC-200型PCR仪（Bio-Rad,USA）；ImageMasterVDS(PharmaciaBiotech,USA)；Poan,USA)。DNAGenRulerTMDNALadderMix(MBIFermentas,USA)，CTAB、β-巯基乙醇、Tris、EDTA、琼脂糖均为分析纯；ISSR引物与RAPD引物由上海生工生物技术服务公司合成。　　表1丹参材料及其来源（略）　　2方法　　2.1基因组DNA的提

6、取与纯化参照Rogers的CTAB方法稍加改进提取基因组DNA［1］，并将基因组DNA用小量PCR产物纯化试剂盒(上海华舜生物工程有限公司)进行纯化处理，以除去丹参中影响PCR反应的色素及多酚类的次生代谢产物。　　2.2PCR-RAPD与PCR-ISSR分析优化的PCR-RAPD反应体系（10μl）含10×PCRbuffer1μl，MgCl2(25mmol/L)0.8μl，dNTPmix(10mmol/L)0.3μl，RAPD引物1.5μl（10pmol/L），TaqDNApolymerase(5U/μl)0.15μl，模板溶液1μl（5～1

7、0ng），ddH2O适量。反应参数：①94℃预变性5min;②94℃变性45s;③36℃复性45s;④72℃延伸2min;⑤重复②～④步骤共37个循环;⑥72℃保温5min。优化的PCR-ISSR反应体系（10μl）含10×PCRbuffer1μl，MgCl2(25mmol/L)0.8μl，dNTPmix(10mmol/L)0.3μl，ISSR引物1.5μl（10pmol/L），TaqDNApolymerase(5U/ul)0.12μl，模板溶液1μl（5ng/μl），ddH2O适量。反应参数：①94℃预变性5min;②94℃变性45s;③5

8、2℃复性45s;④72℃延伸2min;⑤重复②～④步骤共37个循环;⑥72℃保温5min。PCR扩增结束后，以标准DNAGenRulerTMDNALadderMix