明胶-壳聚糖创伤敷料的生物安全性评价

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1、明胶/壳聚糖创伤敷料的生物安全性评价作者：黄治林，姜广建，孟令军，谢艾玲，张义东，郑桓【关键词】壳聚糖Biosafetyevaluationofgelatin/chitosanalstimulationtest,allergiccutaneoustest,hemolysistestandmicronuclEitestorphologyilartothatofthenegativecontrolgroup.Nodifferenceicinjectiontestfoundnostimulatingreactionsuc

2、haserythmaandedema.ThecutaneousallergicrateolyticrateinallgroupsuchloicronuclEItestshoicronucleusrateofthestudygroupilartothatofthenegativecontrolgroupbutthatofthepositivecontrolgroup(P<0.0001).CONCLUSION:Gelatin/chitosanbiomembranehasexcellentbiologicalpro

3、pertiesinthatitcontainsnopyrogenandallergenandnocutaneousstimulation.Itsbiosafetyanalysisshosa应用染液,敌克松(Dexon)二氨基芴(2AF)2.4二硝基氯苯甲醇,均为实验室自备；小牛血清由中国医学科学院血液研究室提供；L929细胞由中国医学科学院肿瘤研究所提供；大鼠、小鼠、白色豚鼠由中国医学科学院动物研究室提供.　　1.2生物学相容性试验根据我国及ISO《生物材料和医用装置生物学评价试验项目》选择［2］.浸提液的制备：按

4、200g/L分别将材料置于生理盐水和纯花生油中，分别在60~70℃浸提24h，在121℃下浸提30min，制得低温浸提液和高温浸提液，过滤后溶液经高温消毒（124℃，2h），冷却，置37℃恒温箱中备用.　　1.2.1细胞毒性试验［3］（直接接触法）将明胶/壳聚糖膜、医用涤纶无纺布（阴性对照组）及聚氯乙烯（阳性对照组）用蒸馏水冲洗干净，滤纸吸干后剪成碎屑（碎屑要足够小，便于在显微镜下观察），用压力蒸汽灭菌121℃消毒30min，将材料分别放入96孔培养板内，细胞培养板分3组（明胶/壳聚糖膜、阳性对照组、阴性对照组），

5、每组12孔，每孔加入细胞培养液2mL，置37℃培养箱内，24h后取出备用.将已培养48h生长旺盛的L929细胞按下式（国家标准）计算出细胞密度（细胞数/mL）：　　配制成4×104/mL的细胞悬液，取出96孔细胞培养板，分别加入细胞悬液0.5mL，置37℃培养.于培养后的第1，2，4，7d，每组各取3孔进行细胞形态观察和细胞计数.判定标准：无毒细胞形态正常、贴壁生长良好，L929细胞呈棱形或不规则三角形；轻微毒细胞贴壁生长好，但可见少数细胞圆缩，偶见悬浮死细胞；中等毒细胞贴壁生长不佳，细胞圆缩较多，达1/3以上，见

6、悬浮死细胞；严重毒细胞基本不贴壁，90%以上呈悬浮死细胞.各组细胞按下式（国家标准）计算细胞相对增殖度（RGR）:　　按国家标准，细胞相对增殖度分为6级：>100%为0级；75%~100%为I级；50%~74%为II级；30%~49%为III级；15%~29%为IV级；0~14%为V级.只有细胞毒性为I级或0级的生物材料才能用于体内实验.　　1.2.2皮肤致敏试验选用18只健康白色豚鼠，体质量250~450g，雌雄各半，随机分成实验组、溶剂组及阳性对照组，每组6只，实验前各组各鼠背部去毛，3组动物分别在脱毛区

7、分别涂敷0.1mL浸出液，10mL/L冰醋酸溶液及5mL/L2.4二硝基氯苯，并于其后7d，14d重复涂敷上述溶液0.1mL，28d再将各鼠原试验区对侧脱毛后，涂敷上述各溶液0.1mL，连续观察3d，记录各鼠试验区皮肤组织反应，包括红斑、水肿、水泡、坏死.皮肤致敏反应评分按Tab1标准进行.　　皮肤反应按标准评分后，根据试验组与对照组豚鼠皮肤反应的差别，按如下标准评价皮肤刺激性:平均分数0.00~0.49,无刺激；0.50~2.99,轻微刺激；3.00~5.99,中等刺激；6.00~8.00,严重刺激.表1皮肤致敏

8、反应评分标准（略）　　1.2.3皮肤刺激试验［4］（皮内注射试验）选成年家兔6只，体质量3.1~4kg，随机分为2组，剪除兔背部毛，于脊柱两侧确定两块5cm×5cm实验区，每区选5个点，各点间距2cm.第1组在兔脊柱右侧实验区每点皮内注射明胶/壳聚糖膜花生油浸出液0.2mL，左侧每点皮内注射花生油0.2mL.第2组则于右侧注射生理盐水浸出液0.2mL，左侧注