薄层色谱法评价不同产地何首乌的品质

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1、薄层色谱法评价不同产地何首乌的品质【摘要】目的建立评价何首乌质量的薄层色谱指纹图谱。方法以石油醚(30～60℃)醋酸乙酯甲酸（15∶5∶1），三氯甲烷甲醇水（6.5∶2.25∶0.42，冰醋酸调pH=4）两种不同的展开系统对何首乌有效成分进行薄层色谱分离并定量扫描，以峰高进行聚类分析。结果所建立的薄层色谱指纹图谱可以区别不同产地的何首乌，聚类分析将10个何首乌样品分为4类。结论薄层色谱指纹图谱可快速有效地鉴别何首乌，并评价其质量。【关键词】何首乌；薄层色谱；指纹图谱；聚类分析　　Abstra

2、ct：ObjectiveToestablishthin-layerchromatography(TLC)fingerprintofRadixPolygoniMultiflorifromdifferentareas.MethodsTheeffectiveponentsofRadixPolygoniMultifloriobilephaseonTLC.ThentheTLCchromatogramsdifferentareascouldbedistinguishedbyTLCfingerprints.The

3、10samples;Clusteranalysis　　中药何首乌RadixPolygoniMultiflori为蓼科植物何首乌（PolygonummultiflorumThunb.）的干燥块根，具解毒、消痈、润肠通便之功效［1］。主要分布在广西、广东、贵州、四川、湖北、江苏、河南，此外，云、陕、陇、湘、赣、浙、闽等地也有分布［2］。何首乌的有效成分主要包括三大类：蒽醌类、2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷类和磷脂类化合物，其药理作用各有不同［3］。仅以一种或少数几种有效成分或

4、指标成分难以全面控制药材及其制剂的质量。中药指纹图谱能够比较全面反映中药的特征，是对中药物质基础的整体表达，已逐步成为控制中药材及其制剂质量的手段之一。何首乌的指纹图谱研究多为HPLC法［4～6］，而薄层色谱由于操作简单，展开剂组成灵活，色谱后衍生方便，可以提供色彩斑斓的彩色图像，直观易辨等优点［7］，对HPLC法是一个很好的补充。　　本实验在建立何首乌薄层色谱指纹图谱的基础上，进一步引入化学计量学方法对几个主产区何首乌进行质量评价。　　1器材　　1.1仪器与材料薄层色谱扫描仪CAMAGTLCsca

5、nner3（瑞士卡玛公司）；C-Na），分别以展开系统I：三氯甲烷甲醇水（6.5∶2.25∶0.42，冰醋酸调pH=4）和展开系统II：石油醚(30～60℃)醋酸乙酯甲酸（15∶5∶1）展开，紫外灯下（365nm）检测并成像；采用双波长法（λs=300nm，λR=370nm）扫描。　　1.6数据分析　以10个不同产地样品为变量，薄层扫描获得的14个特征峰的峰高为变量参数，采用SPSS11.5软件进行聚类分析。　　2结果　　2.1何首乌样品在两种展开系统下的薄层色谱荧光图像（见图1）。图1a中

6、，何首乌在展距20～120mm间检出多个斑点，其中亮蓝色斑点为2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷，近前沿处橙红色斑点为大黄素，与大黄素甲醚分离效果差。图1b中，何首乌的两种主要羟基蒽醌类化合物大黄素和大黄素甲醚得到了很好的分离，两种展开系统能够实现分离互补。　　磷脂类化合物是何首乌的另一类有效成分，曾以磷脂酸（Laphosphatidylethanolamine，PA）和磷脂酰胆碱（Laphosphatidylcholine，PC）为对照对磷脂类成分进行研究，但未能

7、观察到PA和PC的斑点。因此本研究仅以蒽醌和2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷类成分综合评价何首乌药材的内在质量。　　图1不同产地何首乌的薄层色谱图（略）　　2.2TLC指纹图谱的聚类分析薄层色谱图无法区别差异较小的类别，聚类分析法［8］属于无监督的模式识别法，它是对一组尚无明确分类的样本，根据它们所表现的变量特征，按相似程度的大小加以归类，在模式空间中找到客观存在的类别。　　广东德庆何首乌的薄层扫描轮廓图（见图2），有部分峰没有达到基线分离，峰面积受积分参数的影响，重现性较

8、差，而峰高相对较稳定，故用峰高值进行分析。在展开系统I中选取10个共有峰（主要为苷类等极性较大的化学成分），见图2a；在展开系统II中选取4个共有峰（主要为游离蒽醌等极性较小的化学成分），见图2b。以14个共有峰的峰高为变量参数，进行聚类分析，结果见图3a。1～9号样品聚成的分支与10号广西田阳样品为平行支，亲缘关系远；1～9号样品又分为3支：1号广东德庆样品与5号广西靖西样品为亲缘关系密切的1支；6号重庆缙云山样品与9号贵州施秉样品为1支；2号河南济源、4号河南嵩山