肠道病毒71型分子生物学研究论文

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1、肠道病毒71型分子生物学研究论文【摘要】就有关EV71病毒生物学特征、病毒的复制、诊断技术、EV型别鉴定及分子流行病学等方面作一综述。【关键词】肠道病毒71型基因型分子流行病学Abstract:Itmakesrevieolecularepidemicscience.Keyolecularepidemicscience近年，肠道病毒71型(EV71)感染在世界各地不断出现爆发流行的报道。EV7I感染主要引起手足口病，但所致的神经系统并发症可导致死亡或永久性肌麻痹。本文从有关EV71病毒生物学特征、病毒的复制、诊断技术、EV型别鉴定及分子流行病学等方面作一综述

2、。1病毒的一般特征1.1病毒颗粒结构及理化性质肠道病毒71型(EV71)属于小RNA病毒科(Picornaradae)肠道病毒属(Enterovirus)的成员［1］。EV71的病毒颗粒为二十面体立体对称的球形结构，无包膜和突起，直径大约在24～30nrn，核酸为单股正链RNA。病毒粒子的衣壳组成非常复杂，首先由VPI、VPZ、VP3和VP4四种外壳蛋白构成原聚体(Protomer)，再由5个原聚体拼装成具有五聚体样结构的亚单位(Pentamer)。四种结构蛋白中.freelRNA合成病毒蛋白，然后再作为模板在病毒RNA聚合酶的作用下合成负链RNA。后者又

3、作为模板在细胞内质网进一步合成大量的正链RNA。体外实验证实:病毒基因组的复制至少需要病毒RNA聚合酶3C、末端结合蛋白VPg以及一种以上的宿主细胞蛋白。随着大量病毒正链RNA在细胞浆内的堆积，病毒开始进入子代毒粒的组装阶段。由于蛋白酶3C或3CD的增多以及活性的增强，加速了Pl前体蛋白的切割。其产物构成的原聚体组成五聚体，并进一步包装病毒VPg一阴A形成病毒子粒［2］。一般情况下，肠道病毒的原病毒毒粒无感染性，经过蛋白酶的再加工(水解切割P1，产生钾1一4多肽)才产生有感染性的病毒粒子［3］。3EV的诊断技术3.1核酸杂交技术由于EV各型间存在序列高度保

4、守区,利用针对此保守区的通用互补脱氧核糖核酸(cDNA)核酸探针可进行大范围的EV诊断［4］。杂交技术已能成功地检测出可疑病例临床标本中的EVRNA［5］,而且原位杂交技术可以提供病毒感染的组织细胞分布及其与炎症和坏死之间的关系的信息［6］。但是核酸杂交技术过程较复杂,且敏感性不太高,特别当用于检测脑脊液中RNA时。3.2逆转录(RT)PCR技术根据EV属特异性的高度保守序列设计其通用引物,为提高其检测敏感性,进行套式PCR能够检出包括无法进行细胞培养和定型的大部分EV分离物,还可直接从临床标本中检测EV核酸,整个过程一般在5h左右完成［7］。周世力［8

5、］利用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)方法扩增得到肠道病毒71型(EV71SHZH03)外壳蛋白VP1基因,经序列测定证实后,.freelermediatedpolymerasediagnosticroutineandpersistentinfections［J］.JClinMicrobiol,1992,30:160165.［4］RotbartHA.Nucleicaciddetectionsystemsforenteroviruses［J］.ClinMicrobiolREV,1991,4:156168.［5］CovaL,KopeckaH,Ayma

6、rdM,etal.UseofcRNAprobesforthedetectionofenterovirusesbymolecularhybridization［J］.JMedVirol,1988,24:1118.［6］KlingelK,KandolfR.Molecularinsitulocalizationtechniquesindiagnosisandpathogenicitystudiesofenteroviralheartdisease［J］.ClinDiagnVirol,1996,5:157166.［7］VanVlietKE,GlimakerM,

7、LebonP,etal.MulticenterEValuationoftheAmplicorenterovirusPCRtestpatientseningitis［J］.JClinMicrobiol,1998,36:26522657.［8］周世力，李琳琳，何雅青.肠道病毒71型SHZH03株VP1基因在毕赤酵母中的表达［J］.华中师范大学学报(自然科学版)，2007，41（2）：260262.［9］ObersteMS,MaherK,KilpatrickDR,etal.MolecularEVolutionofthehumanenteroviruses:

8、correlationofserotypeergInfectDis