植物源农药杀虫与抑制几丁质酶活性的测定

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1、植物源农药杀虫与抑制几丁质酶活性的测定作者：周桂孙果宋，黄科林，林润国，张桂华，邓光辉【摘要】目的研究青蒿叶、桉树叶、红树植物白骨壤叶乙醇提取物对大蜡螟虫的毒杀作用以及对虫体几丁质酶活性的抑制作用。方法采用室内药液喷虫法测定3种植物乙醇提取物的杀虫活性与抑制几丁质酶活性。结果青蒿、桉树、红树植物白骨壤叶乙醇提取物对大蜡螟24h的校正死亡率分别为(69.00±3.87)%，(53.47±11.63)%，(18.60±6.70)%。对大蜡螟几丁质酶的抑制率分别为(20.33±1.42)%，(20.59±1.72)%，(13.56±1.58)

2、%。结论青蒿叶与桉树叶植物乙醇提取物的杀虫活性与抑制几丁质酶活性显著高于红树植物白骨壤叶乙醇提取物(P<0.05)。【关键词】植物源农药;大蜡螟;杀虫活性;几丁质酶　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectsofsouthernangroveavicenniamarinaleavesethanolextractsontheinsecticidalactivityandchitinaseinhibitoryactivityagainstGalleriamellonella.MethodsTheinsec

3、ticidalactivityandchitinaseinhibitoryactivityofthethreeplantethanolextractsethod.ResultsTheresultsshoent,thecorrecteddeathratiosofsouthernangroveavicenniamarinaleavesethanolextractangroveavicenniamarinaleavesethanolextractmarkedly.　　Keyellonella;Insecticidalactivity;Chit

4、inase　　21世纪全球农业发展的一个重要趋势是更加注重农产品质量安全性,倡导安全优质绿色食品[1，2]，从天然植物中提取杀虫活性物质防治农林害虫,已成为研究热点,并对现代农药研究具有重要意义。　　几丁质酶(chitinase)可以水解昆虫体壁和中肠中的几丁质，在昆虫变态发育过程中扮演重要角色。几丁质酶抑制剂通过抑制几丁质酶活性干扰昆虫正常变态发育过程而达到杀虫的目的。由于动植物机体不含几丁质，故以几丁质酶作为靶标的新型生物农药具有安全无害的优点[3，4]。目前已筛选出近十种不同来源的几丁质酶抑制剂,包括糖类与肽类几丁质酶抑制剂[4]

5、。而有关青蒿叶、桉树叶、红树植物白骨壤叶来源的几丁质酶抑制剂未见报道。　　大蜡螟(Galleriamellonella)属螟蛾科蜡螟亚科,是养蜂业的主要害虫。由于大蜡螟易于人工饲养，在农药学上可作为生测试虫[5]。本研究以大蜡螟为测试对象，研究青蒿叶、桉树、红树植物白骨壤叶乙醇提取物对它的毒杀作用以及对虫体几丁质酶活性的抑制作用，为开发新型安全植物源农药提供参考。1材料　　大蜡螟虫(广西甘蔗研究所提供)。青蒿叶、桉树叶、红树植物白骨壤叶采自广西药用植物园、广西防城港等地。　　2方法　　2.1植物源农药提取物的制备称取10g青蒿叶、桉树叶

6、、红树植物白骨壤叶干燥粉末，加入20ml50%乙醇，超声萃取20min，过滤，滤液减压蒸馏，收集膏状物并称重，用95%的乙醇溶解，配制成浓度为100mg/ml的植物提取物母液备用。　　2.2杀虫实验选择虫龄与虫体大小基本一致的试虫20只，置于垫有中性滤纸的90mm保湿玻璃培养皿中,将植物提取物母液稀释为1.5%的浓度(内含1%的吐温80)，作为供试药液。采用小型喷雾器喷雾法对准虫喷雾,每皿喷药液约1ml。对照组用95%的乙醇代替供试药液，将培养皿放置于26℃的人工气候培养箱培养24h(昼夜比16∶8)。24h后检查死虫数，计算死亡率与校

7、正死亡率。死亡率(%)=(死亡的虫子/虫子总数)×100%，校正死亡率(%)=[(死亡率-对照组死亡率)/(1-对照组死亡率)]×100%。测定活虫体几丁质酶活力，计算酶活抑制率。每处理设3个重复。　　2.3虫体蛋白质含量的测定考马斯亮蓝G-250法测定大蜡螟虫匀浆液中蛋白质含量[6]。　　2.4N-乙酰氨基葡萄糖还原糖的测定3，5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定[6]。　　2.5几丁质酶液的提取与活性测定取1g虫体，冰浴研磨匀浆,制成10%匀浆液，离心(3500r/min)20min取上清用于酶活的测定。取0.5ml上清液加入lml

8、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(pH6.6)，0.5ml1.5%胶体几丁质，于37℃水浴振荡酶反应30min，立即沸水浴10min终止酶反应后离心(4000r/min)5min后取上清液0.5ml，采用DNS法测